１４１２陕西中医２０１１年第３２卷第１０期槐米中芦丁的提取结晶与含量测定李慧王明明延安大学附属医院药剂科（延安７１６０００）摘要目的：探讨制备高纯度的芦丁方法。方法：采用酸提碱沉法从槐米中提取芦丁，并经过精 制分离得芦丁对照品，用化学法、薄层层析法、
核磁共振法进行鉴定，高效液相色谱法测定 其含量。结果：经以上三种方法鉴定表明芦丁样品与标准品基本一致，高液相测得舍量 ９８．０６％。结论：此种实验室制备芦丁对照品的方法操作简单易行，产品纯度较高可作为 对照品代替标准品用。 槐花／分析槐花／化学 质量标准主题词中药／标准【中图分类号】Ｒ２８２．５【文献标识码】Ａ【文章编号】１０００一７３６９（２０１１）１０－１４１２－０２ 芦丁，亦称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发 现的含芦丁的植物有５０种以上，其中以槐米和养麦叶 中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁属于 黄酮类化合物，在心脑血管疾病的治疗上起到了举足 轻重的作用，具有ＶＰ样作用。有助于保持毛细血管 正常弹性，同时还有抗炎、抗病毒、抗氧化等作用。其 临床效果肯定，副作用少，同时也是一种植物原料 药［１］。本实验拟探究一种实验室制备高纯度芦丁的方 法，用作对照品或满足其他特殊需要的试剂。 １材料与仪器１．１试 剂纯化，称取精制芦丁０．２５ ｇ，用少量甲醇使之溶解，加 人葡聚糖凝胶柱顶，用甲醇洗脱，试管收集，１５ ｍＬ／ 管，共收集２２管，用聚酰胺膜鉴定芦丁并作如下合并 收集液。第１瓶１～１０管，第２瓶１１～２２管；然后水 浴浓缩至原液的一半，冷置，仅第一瓶出现黄绿色微细 针状结晶，再继续浓缩，６０℃干燥即得芦丁纯品。 ２．３芦丁的鉴定 ２．３．１化学法鉴定本品为黄色结晶粉末，熔程 为１８８～１９０℃（梯勒熔点管法），盐酸镁粉反应呈阳 性；氨性氯化锶反应呈阳性显示有邻二酚羟基；锆盐枸 橼酸反应呈阳性显示有３及５一羟基存在。水解液用薄 层层析鉴定，显示有葡萄糖及鼠李糖存在。 ２．３．２薄层层析鉴定用３ ｃｍＸ ５ ｃｍ的聚酰胺芦丁标准品（中国药品生物制品鉴定所），甲醇为色谱醇，其它试剂均 为分析纯，水为重蒸水。芦丁购于延大医附院药房经 鉴定无误。１．２仪器日本岛津高效液相色谱仪膜，选３种展开剂：分别为Ａ，丙酮：水（３：１）；Ｂ，氯 仿：甲醇（５：４）；Ｃ，醋酸乙酯：甲酸：水（８：１：１）。 氨熏后喷显色剂３％的三氯化铝显色，经重结晶的芦 丁样品在上述３种展开剂中均只显一个斑点。 ２．３．３氢核磁共振法鉴定 准品图一致。 ２．４芦丁含量测定（ＨＰＬＣ法）［３１ ２．４．１色谱条件流动相为甲醇４．３％乙酸（５５ ：４５），应用前经混合纤维素酯微孔滤膜过滤，超声脱 芦丁样品与芦丁标（ＬＣｌＯＡＴｖｐ溶剂输送泵，ＳＰＤｌ０Ａｖｐ紫外可见检测 器，ＣＴ０１０Ａｓｐ柱温箱），ＨＷ２０００色谱工作站（南京 千谱软件公司）。电子分析天平（型号ＢＳｌ２４Ｓ）， ＪＢ２０２一电热恒温干燥箱（上海金忠科学仪器有限公司 制造），ＤＬ－３６０超声波清洗皿（浙江象山县石浦海天电 子仪器厂），ＴＧＬ－１６台式高速离心机（上海冠戈实业有 限公司制造），紫外分光光度计（２４０１ＰＣ－日本岛津）。 ２实验方法与结果２．１芦丁的提取精制采用酸提碱沉法［２］：称取气，流速为１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，进样量为２０肛ｌ，检测波长为２５４槐米粉，置５００ｍＬ烧杯中，加沸水、硼砂搅拌，于石棉 网上加热至微沸，然后加入适量饱和石灰水溶液，保持 ｐＨ８～９之间，并不断地搅拌，微沸３０ｒａｉｎ后，过滤，滤 液收集。以同法再次收集滤液并合并，待滤液温度降 至６０～７０℃之间时用浓盐酸调ｐＨ ４＂－－－５之间，当温度 降至室温时放入冰箱静置１２ ｈ，使沉淀完全，抽滤，沉 淀，用蒸馏水洗至中性，干燥得粗品芦丁，蒸馏水重结 晶，得精制芦丁。２．２ｎｍ，芦丁的出峰时间为３～４ ｍｉｎ，该色谱条件下 ２．４．２最大波长的选择配置芦丁标准品溶液对照品及样品的色谱一致。 浓度为０．００２．０４ ｍｇ／ｍＬ在紫外分光光度计中扫描， 结果显示最大吸收波长有２１４、２５４、３６０ｎｍ，由于在２１４ｎｍ处干扰因素多，因此高效液相选择在２５４ ｔｌｍ处测定。 ２．４．３供试品溶液的配制 精密称取经变色硅芦丁的纯化用葡聚糖凝胶柱进一步分离胶干燥的芦丁标准品０．０１００５９，芦丁样品１号（为经万方数据陕西中医２０１１年第３２卷第１０期 过葡聚糖凝胶柱分离的）０．０１００５１４１３ｇ，芦丁样品２号０２于２．０％，说明本实验的重现性较好。 ３讨论用酸提碱沉法提取芦丁具有工艺简 单、效率高和较经济等优点，采用高效液相法测定芦丁 的含量，该法使用的试剂常见，方法精确、灵敏、线性范 围宽，稳定性和重现性均能满足要求［５］。测得芦丁的含 量为９８．０５％，可以代替对照品测定物质的含量和满 足其它特殊需要的试剂。 在芦丁的提取工艺中，由于用的是酸提碱沉法，所 以加入的石灰水的量和浓盐酸的量是本试验的关键， 当ｐＨ为１０时，产品质量为１．５ ｇ，当ｐＨ为９时，产品 质量为２．３ ｇ，当ｐＨ为８时，产品质量为１．９７ ｇ，当 ｐＨ为７时，产品质量为１．１０ｇ。（ｓｋ经葡聚糖凝胶柱分离的）０．０１０ｇ，分别置于５０ｍＬ容量瓶内，用甲醇定容，在超声清洗皿中超声３ ｒａｉｎ，使之全部溶解，然后在分别倒少量入ＥＰ管中离心１０ ｍｉｎ，１２０００ ｒ／ｍｉｎ。得芦丁标准品溶液浓度为０．２０１ｍｇ／ｍＬ，芦样１号浓度为０．２００１ ｍｇ／ｍＬ，芦样２ ２．４．４标准曲线的制备 芦丁标准品溶液的浓号浓度为０．２００４ ｍｇ／ｍＬ。 度为０．２００１ｍｇ／ｍＬ，将其稀释成１，１／２，１／４，１／１６，１／ ６４，１／２５６系列浓度，编号为１，２，３，４，５，６，吸取２０弘１ 进样，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲 线如下，进行线性回归处理，求出回归方程：Ｙ一４Ｅ＋０７Ｘ一２ ６６０．２，ｒ＝０．９９９６，浓度单位是ｍｇ／ｍＬ，峰面２８１ ２５～Ｏ．２０１葡聚糖凝胶对分离黄酮类化合物效果很好，此方 法即简便，又适合实验室操作。实验产品纯度高，含量 达９８．０５％，可代替芦丁标准品测定芦丁制剂中的芦 丁含量。 实验中笔者发现芦丁极易被氧化变色，要注意避 光干燥保存。选择沸水溶液提取以破坏酶，而且在槐 米中果胶和粘液质较多。提取液通常因含有大量粘稠 的杂质而难以过滤，所以本文直接用水加石灰乳提取 芦丁，方法更加有效，但应注意加硼砂以保护临二酚羟 基，而且整个过程对酸度控制要求较高。 柱温对含量测定的影响较小，随着柱温的增加，保 留时间有所缩短，峰的扩散有所改善，但对含量测定影 响较小。 参考文献［１３杨德全，叶建阳，刘鸿云，等．从苦养麦中提取芦丁的 研究口］．延安大学学报（自然科学版），１９９７，１６（４）：６７． ［２］宋延生．天然防晒剂一芦丁口］．日用化学工业杂志，１９９１，５：４７．积的范围在２２８７１０．５ ｏＶ?ｓ～７４９４ ０３６．５弘Ｖ?ｓ内［４］。结果表明芦丁的浓度在０．００６ｍｇ／ｍＬ范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。 ２．４．５样品的含量测定将配制好的芦丁样品 １号，２号进样，测得峰面积，然后代入标准曲线得浓 度。测得样品的含量为９８．０５％。 ２．４．６加样回收实验 分别取３份已知浓度的样品１号溶液０．８ｍＬ放入ＥＰ管中，在分别加标准品 溶液０．１，０．２，０．３ ｍＬ，甲醇０．２，０．１，０ ｍＬ，定于１．１ ｍＬ，离心１０ ｍｉｎ，１２０００ ｒ／ｒａｉｎ，结果见附表。 附表 回收率测定结果［３］刘林嚣，孙曾培．苦养麦疗效粉中芦丁的含量测定２．４．７芦丁样品精密度实验精密量取芦丁样 品１号溶液１ ｍＬ放人ＥＰ管中，离心１０ ｍｉｎ，１２０００［Ｊ］．药物分析杂志，１９９１，１１（１）：４９． ［４］ 胥秀英．高效液相色谱法测定大枣中芦丁的含量ｒ／ｍｉｎ．供试品５次测量结果ＲＳＤ％为０．３３，小于２． Ｏ％，说明本试验的精密度较好。 ２．４．８芦丁样品重现性实验精密量取芦丁样 品１号溶液０．８ ｍＬ于ＥＰ管中，在加０．２ ｍＬ甲醇，分 别做５份，离心１０ ｍｉｎ，１２０００Ｄ］．食品科学，２００４，２５（４）１４７―１４９． ［５］何铭清．中草药有效成分理化与药理特性［Ｍ］．长 沙：湖南科学技术出版社，１９７９：２０３１． （收稿２０１１－０５．１３；修回２０１１－０７―１５）ｒ／ｍｉｎ。ＲＳＤ％０．４４，小欢迎投稿欢迎订阅万方数据槐米中芦丁的提取结晶与含量测定作者： 作者单位： 刊名： 英文刊名： 年，卷(期)： 李慧， 王明明 延安大学附属医院药剂科,延安,716000 陕西中医 SHAANXI JOURNAL OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE )参考文献(5条) 1.何铭清 中草药有效成分理化与药理特性 1979 2.胥秀英 高效液相色谱法测定大枣中芦丁的含量 .刘林;孙曾培 苦荞麦疗效粉中芦丁的含量测定 .杨德全;叶建阳;刘鸿云 从苦荞麦中提取芦丁的研究 .宋延生 天然防晒剂-芦丁 1991本文链接：http://d..cn/Periodical_shanxzy.aspx
槐米中芦丁的提取结晶与含量测定―汇集和整理大量word文档,专业文献,应用文书,考试资料,教学教材,办公文档,教程攻略,文档搜索下载下载,拥有海量中文文档库,关注高价值的实用信息,我们一直在努力,争取提供更多下载资源。& 表面活性剂增敏――牛血清白蛋白荧光猝灭法测定槐花中芦丁含量
表面活性剂增敏――牛血清白蛋白荧光猝灭法测定槐花中芦丁含量
摘 要：目的：应用牛血清白蛋白荧光猝灭法建立一种测定槐花中芦丁含量的新方法。方法：牛血清白蛋白（BSA）具有很强的内源荧光性,而芦丁溶液本身不产生荧光。当芦丁与BSA结合后,会导致其荧光强度下降,表面活性剂吐
【题　名】表面活性剂增敏――牛血清白蛋白荧光猝灭法测定槐花中芦丁含量
【作　者】刘桂林 杨慧仙 魏竞智
【机　构】岳阳市云溪区血吸虫病防治站 湖南岳阳414009 南华大学公共卫生学院 湖南衡阳421001
【刊　名】《现代生物医学进展》2011年 第2期 354-356页　共4页
【关键词】芦丁 牛血清白蛋白（BSA） 荧光猝灭 T-80
【文　摘】目的：应用牛血清白蛋白荧光猝灭法建立一种测定槐花中芦丁含量的新方法。方法：牛血清白蛋白（BSA）具有很强的内源荧光性,而芦丁溶液本身不产生荧光。当芦丁与BSA结合后,会导致其荧光强度下降,表面活性剂吐温-80（T-80）对体系有促进荧光猝灭作用。BSA在λex=338nm处的荧光猝灭程度与芦丁的量在一定浓度范围内呈良好的线性关系,据此建立测定槐花中芦丁含量的新方法。结果：该结合物的最大发射波长为λmax=338nm,与芦丁摩尔浓度在6×10-7-3.0×10-5mol.L-1范围内线性关系良好。其线性回归方程为ΔF=136.36CRu（×10-5mol.L-1）-0.5454,相关系数r=0.9976,检出限为1.58×10-7mol.L-1,RSD为2.8%-4.3%,加标回收率为97.6%~101.2%。结论：本方法操作简便、快速,用于实际样本的测定,结果满意。
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紫外分光光度测样品中芦丁含量
亚硝酸钠和硝酸铝方法测定样品中的芦丁含量，问问各位其他黄铜类物质（比如儿茶素、没食子酸）对结果有何影响？
/question/b80ef5e5c8dcadbf494f2e.html
按照这个定义，儿茶素有邻位无取代的邻二酚羟基，就可以显色。
没食子酸有连续三个羟基，那就不好说了，先让它存疑。
再来看这个《太行菊不同器官中绿原酸和4种黄酮类物质含量研究》，在知网里看摘要就行。
“以芦丁为对照品，采用硝酸铝络合紫外分光光度法，以没食子酸为对照品，采用福林酚法”。
没食子酸貌似只能用福林酚法。 不懂，帮顶 : Originally posted by ljsrzc at
不懂，帮顶 :hand: : Originally posted by 望陈莫及1984 at
/question/b80ef5e5c8dcadbf494f2e.html
按照这个定义，儿茶素有邻位无取代的邻二酚羟基，就可以显色。
没食子酸有连续三个羟基，那就不好说了，先让它存疑。
再来看这个《太行 ... 谢谢 ，再问一下在此反应在碱性环境下，请问这个pH值是多少呢？我采用的一篇文献是龙爪槐花中有效成分芦丁含量测定，里面只讲明氢氧化钠用量，没有说明氢氧化钠浓度。 我查到的是：氢氧化钠1mol/L。我现在没法查文献，这是我在百度上查到的：
/bbs/thread/57783
这篇文献没讲清楚，你可以再查一篇，黄酮的文章太多了。 NaoH我用的是1mol每升,NANO2:5g-100ml,AL(NO3)3:10g-100ml