请问这个女人会死吗KD是个什么啊，代表什么呢？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-05-24 12:56 标签： 请问开个茶庄怎么样
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请问20多kD的蛋白做Western可不可以用湿转？另外需要注意些什么？
如题，做了两次Western了，第二次做的时候用立春红染色的时候感觉条带看到了一些，但是结果还是没有条带，预染Marker也不清晰。这次打算用0.22um的膜来做，不知道结果会不会好一些。按理来说小分子应该用半干法，但是操作全是自己摸索的，不大会弄。半干法因为没有海绵的关系，感觉三明治貌似夹不紧啊，是不是滤纸要加多点加到很厚才行呢？请大家帮忙说说自己的经验
补充一下：另外看到Western的技术手册里说，SDS会阻碍小分子蛋白和膜的结合，但是又说PVDF膜适用于有SDS存在的时候与蛋白质结合。那小分子蛋白用PVDF膜电转液里面到底要不要加SDS呢？加的话浓度多少比较合适？0.04%？0.1%？ 20kd的我们都是用的湿转的，效果ok的。。丽春红染色看到的条带基本都是杂带，你要的条带是看不到的。。。。预染的maker看不到？在胶上清不清楚呢？是不是时间不够呢。。buffer没有问题吗。。半干没有做过。。不好意思了。。 : Originally posted by shenxing325 at
补充一下：另外看到Western的技术手册里说，SDS会阻碍小分子蛋白和膜的结合，但是又说PVDF膜适用于有SDS存在的时候与蛋白质结合。那小分子蛋白用PVDF膜电转液里面到底要不要加SDS呢？加的话浓度多少比较合适？0.04% ... 加不加SDS都可以转20kDa的蛋白。加的话，我的protocol里是用0.0375%。还有就是丽春红染色不如考马斯亮蓝灵敏，只能染出丰度高的蛋白。你的marker也要上很多才可以看得。你可以用prestained的marker，就不用预染直接看到了。 : Originally posted by royxueli at
20kd的我们都是用的湿转的，效果ok的。。丽春红染色看到的条带基本都是杂带，你要的条带是看不到的。。。。预染的maker看不到？在胶上清不清楚呢？是不是时间不够呢。。buffer没有问题吗。。半干没有做过。。不好意 ... 求问你们的湿转条件？我需要转15KD的蛋白，以前是半干，反而不是很好。你们的电流，电压，时间，滤纸层数是多少呢？ : Originally posted by royxueli at
20kd的我们都是用的湿转的，效果ok的。。丽春红染色看到的条带基本都是杂带，你要的条带是看不到的。。。。预染的maker看不到？在胶上清不清楚呢？是不是时间不够呢。。buffer没有问题吗。。半干没有做过。。不好意 ... 可以可以传授一下你们做20kD蛋白的经验呢？比如说转膜电流多大，多长时间之类的 : Originally posted by cicelyzh at
加不加SDS都可以转20kDa的蛋白。加的话，我的protocol里是用0.0375%。还有就是丽春红染色不如考马斯亮蓝灵敏，只能染出丰度高的蛋白。你的marker也要上很多才可以看得。你可以用prestained的marker，就不用预染直接 ... 要多上几次Marker啊。。。预染的好贵，肉疼，但是试试看吧，谢谢啊 : Originally posted by shenxing325 at
可以可以传授一下你们做20kD蛋白的经验呢？比如说转膜电流多大，多长时间之类的... 我用的湿转是400mA转1-1.5小时。如果大的疏水性蛋白，可以转2h。
老式的半干转移要根据胶和膜的面积（平方厘米）计算电流（mA）。新买的有些仪器可以电流可以上到1-2A，10分钟就够了。 : Originally posted by cicelyzh at
我用的湿转是400mA转1-1.5小时。如果大的疏水性蛋白，可以转2h。
老式的半干转移要根据胶和膜的面积（平方厘米）计算电流（mA）。新买的有些仪器可以电流可以上到1-2A，10分钟就够了。... 这么长时间都不会转过吗？我之前做的40多kD的蛋白，用200mA，1.5个小时转的效果就挺好的，所以我做20kD的这个用的是1个小时，但是就没转上。。。所以这次换了0.22的膜，打算做45min : Originally posted by shenxing325 at
这么长时间都不会转过吗？我之前做的40多kD的蛋白，用200mA，1.5个小时转的效果就挺好的，所以我做20kD的这个用的是1个小时，但是就没转上。。。所以这次换了0.22的膜，打算做45min... 你用的是PVDF膜吗？不会转过的，NC膜的话不好说。 : Originally posted by novodavid at
求问你们的湿转条件？我需要转15KD的蛋白，以前是半干，反而不是很好。你们的电流，电压，时间，滤纸层数是多少呢？... 电压是100v。。如果不能恒压就恒流300mA，反正是那个biorad电源的上限了。。上下各两层滤纸，时间是1个小时 : Originally posted by cicelyzh at
你用的是PVDF膜吗？不会转过的，NC膜的话不好说。... 是PVDF膜。这次转膜预染Marker转上了，但是用立春红染色还是木有蛋白条带，可能是染色有问题吧。。。今天能看到结果怎样。。。 : Originally posted by shenxing325 at
是PVDF膜。这次转膜预染Marker转上了，但是用立春红染色还是木有蛋白条带，可能是染色有问题吧。。。今天能看到结果怎样。。。... 如果marker转上了，你的目的蛋白应该没问题。你可以看看marker是不是转完全了。丽春红染不好可能和蛋白的量有关，看不到也不一定没有。再说，一般的Western的灵敏度比染色要高。祝实验成功。 300mA转1.5小时足够转充分，你也可以适当缩短转膜时间，转完之后把胶染一下看看效果 : Originally posted by cicelyzh at
如果marker转上了，你的目的蛋白应该没问题。你可以看看marker是不是转完全了。丽春红染不好可能和蛋白的量有关，看不到也不一定没有。再说，一般的Western的灵敏度比染色要高。祝实验成功。... :shuai:木有成功。。。marker基本都转上了，蛋白应该也转上了，胶都是透明的了。但是立春红染色没有颜色，最后DAB试剂盒染色也没有条带:shuai:。会不会是标签掉了啊。。。 : Originally posted by shenxing325 at
:shuai:木有成功。。。marker基本都转上了，蛋白应该也转上了，胶都是透明的了。但是立春红染色没有颜色，最后DAB试剂盒染色也没有条带:shuai:。会不会是标签掉了啊。。。... 你确定抗体没有问题吗？如果膜转好了的话应该没问题啊。不知道你说是什么标签？你用的标签抗体检测吗？ : Originally posted by cicelyzh at
你确定抗体没有问题吗？如果膜转好了的话应该没问题啊。不知道你说是什么标签？你用的标签抗体检测吗？... 抗体应该没有问题，同一个表达载体，前两天做的一个40多kD的重组蛋白就做出来了，就是普通的His标签啊 : Originally posted by shenxing325 at
抗体应该没有问题，同一个表达载体，前两天做的一个40多kD的重组蛋白就做出来了，就是普通的His标签啊... 有可能是上样量不同。你的样品也是用菌表达的重组蛋白吗，还是其他宿主的His-tagged蛋白？标签不大可能掉的吧，你做的His-tag是可以用酶切掉的吗？ : Originally posted by cicelyzh at
有可能是上样量不同。你的样品也是用菌表达的重组蛋白吗，还是其他宿主的His-tagged蛋白？标签不大可能掉的吧，你做的His-tag是可以用酶切掉的吗？... 嗯，这个也是自己表达的重组蛋白。想想也是，His标签也不大容易掉。。。那就说明，这个不是我要的蛋白？:cry:那就悲剧了 : Originally posted by shenxing325 at
嗯，这个也是自己表达的重组蛋白。想想也是，His标签也不大容易掉。。。那就说明，这个不是我要的蛋白？:cry:那就悲剧了... 你可以试试用镍柱纯化一下看看。如果能挂柱纯化到的话，起码说明his-tag在上面了，经纯化过的蛋白可以有多种方法进一步鉴定。3个月大的小孩狼苍套检查ss-a/ro52kd/60kd抗体为阳性是怎么回事_百度拇指医生
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?3个月大的小孩狼苍套检查ss-a/ro52kd/60kd抗体为阳性是怎么回事
女|科室：肾内科
广西来宾市中医医院
这是自身免疫指标测定，提示可能有自身免疫引起的狼疮
这个严重吗？要如何治疗，是红斑狼苍吗？
请问患者有什么临床症状体征？？
图片仅提问者本人可见
她身上会长这些，要个把月才好，每隔几天身上又可能长2个
没感觉她有其他的不舒服
看过皮肤科没有？？
SS-A/Ro52/60kD抗体这2项为阳性，是否确认为红斑狼苍
这个不能确诊
那这2项为阳性问题大吗？有没有什么影响，因为她才3个月，很担心
只是参考值，不要过于担心
那还要做什么检查吗？
其实主要是根据临床症状体征诊断的，到较复杂，建议到医院就诊
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你好，这种情况考虑有影响的，建议注意饮食忌辛辣，祝你健康
病情分析：您好！您的SM抗体、SS-A,SS-B抗体均为阳性，考虑有一定罹患系统性红斑狼疮的...
建议可以用中医调理，可以具体的在中医院咨询一下
乙肝e抗体是人体感染乙肝病毒血清学标志物指标之一，它和抗-HBc一样，也无保护作用。过...
您好，不会转的，建议不需要太担心的，弱阳性提示抗体不强，需要加强，并不是说宝宝携...
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