请问一下菌种鉴定的方法和实验步骤
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实验步骤：菌种鉴定工作是各类微生物学实验室都经常遇到的基础性工作.不论鉴定对象属哪一类,其工作步骤都离不开以下三步：①获得该微生物的纯种培养物；②测定一系例必要的鉴定指标；③查找权威性的鉴定手册.
一、经典分类鉴定方法
群体：菌落形态,在半固体或液体培养基中的生长状态等*
个体：细胞形态,染色反应,各种特殊构造等*
营养要求：能源,碳源,氮源,生长因子等*
生理、生化反应
酶；产酶种类和反应物性等*
代谢产物：种类,产量,显色反应等* 经典指标
生态特性：生长温度,对氧的需要,宿主种类等*
生活史特点*
血清学反应*
噬菌体的敏感性*
其它 经典分类法
经典分类法是一百多年来进行微生物分类的传统方法.其特点是人为地选择几种形态生理生化特征进行分类,并在分类中将表型特征分为主、次.一般在科以上分类单位以形态特征、科以下分类单位以形态结合生理生化特征加以区分. * A. 能在 60 o C 以上生长 * B. 细胞大,宽度 1.3~1.8mm ………………… 1. 热微菌属 ( Thermomicrobium ) * B. 细胞小,宽度 0.4~0.8mm * C. 能以葡萄糖为碳源生长 * D. 能在 pH4.5 生长 …………………………… 2. 热酸菌属 ( Acidothermus ) * DD. 不能在 pH4.5 生长 …………………………………… 3. 栖热菌属 ( Thermus ) * CC. 不能以葡萄糖为唯一碳源 ……………… 4. 栖热嗜油菌属 ( 栖热嗜狮菌属 Thermoleophilum ) * AA. 不能在 60 o C 以上生长 二、现代分类鉴定方法
* 　近年来,随着分子生物学的发展和各项新技术的广泛应用,促使微生物分类鉴定工作有了飞速发展.对微生物鉴定工作来说,已从经典的表型特征的鉴定深入到现代的遗传学特性的鉴定、细胞化学组分的精确分析以及利用电子计算机进行数值分类研究等新的层次上.* （一）微生物遗传型的鉴定* DNA是除少数RNA病毒以外的一切微生物的遗传信息载体.每一种微生物均有其自己特有的、稳定的DNA成分和结构,不同微生物间DNA成分和结构的差异程度代表着它们间新缘关系的远近.因此,测定每种微生物DNA的若干重要数据,是微生物鉴定中极其重要的指标：1. DNA的碱基组成(G+Cmol%)* 每一个微生物种的 DNA 中 GC mol% 的数值是恒定的,不会随着环境条件、培养条件等的变化而变化,而且在同一个属不同种之间, DNA 中 GCmol% 的数值不会差异太大,可以某个数值为中心成簇分布,显示同属微生物种的 GC mol% 范围. DNA 中 GC mol% 分析主要用于区分细菌的属和种,因为细菌 DNA 中 GC 含量的变化范围一般在 25 ％～ 75 ％；而放线菌 DNA 中的 GC 比例范围非常窄 (37 ％～ 51%) .一般认为任何两种微生物在 GC 含量上的差别超过了 10 ％,这两种微生物就肯定不是同一个种.因此可利用 G+C mol ％来鉴别各种微生物种属间的亲缘关系及其远近程度.值得注意的是,亲缘关系相近的菌,其 G+C mol ％含量相同或者近似,但 G+C mol ％相同或近似的细菌,其亲缘关系并不一定相似,这是因为这一数据还不能反映出碱基对的排列序列,而且如放线菌的 DNA 的 GC mol% 在 37 ～ 51 之间,企图在这么小的范围内区分放线菌的几十个属显然是不现实的.要比较两种细菌的 DNA 碱基对排列序列是否相同,以及相同的程度如何,就需做核酸杂交试验. 1. DNA的碱基组成(G+Cmol%)* 1）每个生物种都有特定的GC%范围,因此后者可以作为分类鉴定的指标.细菌的GC%范围为25--75%,变化范围最大,因此更适合于细菌的分类鉴定.* 2）GC%测定主要用于对表型特征难区分的细菌作出鉴定,并可检验表型特征分类的合理性,从分子水平上判断物种的亲缘关系.* 3）使用原则：* G+C含量的比较主要用于分类鉴定中的否定每一种生物都有一定的碱基组成,亲缘关系近的生物,它们应该具有相似的G+C含量,若不同生物之间G+C含量差别大表明它们关系远.但具有相似G+C含量的生物并不一定表明它们之间具有近的亲缘关系.1. DNA的碱基组成(G+Cmol%)* 同一个种内的不同菌株G+C含量差别应在4～5%以下；同属不同种的差别应低于10～15%.所以G+C含量已经作为建立新的微生物分类单元的一项基本特征,它对于种、属甚至科的分类鉴定有重要意义.* 若二个在形态及生理生化特性方面及其相似的菌株,如果其G+C含量的差别大于5%,则肯定不是同一个种,大于15%则肯定不是同一个属.* 在疑难菌株鉴定、新种命名、建立一个新的分类单位时,G+C含量是一项重要的,必不可少的鉴定指标.其分类学意义主要是作为建立新分类单元的一项基本特征和把那些G+C含量差别大的种类排除出某一分类单元.2.核酸的碱基组成和分子杂交：* 与形态及生理生化特性的比较不同,对DNA的碱基组成的比较和进行核酸分子杂交是直接比较不同微生物之间基因组的差异,因此结果更加可信.DNA-DNA 杂交 * DNA 杂交法的基本原理是用 DNA 解链的可逆性和碱基配对的专一性,将不同来源的 DNA 在体外加热解链,并在合适的条件下,使互补的碱基重新配对结合成双链 DNA ,然后根据能生成双链的情况,检测杂合百分数.如果两条单链 DNA 的碱基顺序全部相同,则它们能生成完整的双链,即杂合率为 100% .如果两条单链 DNA 的碱基序列只有部分相同,则它们能生成的“双链”仅含有局部单链,其杂合率小于 100% .由此；杂合率越高,表示两个 DNA 之间碱基序列的相似性越高,它们之间的亲缘关系也就越近.如两株大肠埃希氏菌的 DNA 杂合率可高达 100 ％,而大肠埃希氏菌与沙门氏菌的 DNA 杂合率较低,约有 70 ％. G+Cmol ％的测定和 DNA 杂交实验为细菌种和属的分类研究开辟了新的途径,解决了以表观特征为依据所无法解决的一些疑难问题,但对于许多属以上分类单元间的亲缘关系及细菌的进化问题仍不能解决. DNA — rRNA 杂交 * 目前研究 RNA 碱基序列的方法有两种.一是 DNA 与 rRNA 杂交,二是 16S rRNA 寡核苷酸的序列分析. DNA 与 rRNA 杂交的基本原理、实验方法同 DNA 杂交一样,不同的是① 是 DNA 杂交中同位素标记的部分是 DNA ,而 DNA 与 rRNA 杂交中同位素标记的部分是 rRNA .② DNA 杂交结果用同源性百分数表示,而 DNA 与 rRNA 杂交结果用 Tm(e) 和 RNA 结合数表示. Tm(e) 值是 DNA 与 rRNA 杂交物解链一半时所需要的温度. RNA 结合数是 100 m gDNA 所结合的 rRNA 的 m g 数.根据这个参数可以作出 RNA 相似性图.在 rRNA 相似性图上,关系较近的菌就集中到一起.关系较远的菌在图上占据不同的位置.用 rRNA 同性试验和 16SrRNA 寡核苷酸编目的相似性比较 rRNA 顺反子的实验数据可得到属以上细菌分类单元的较一致的系统发育概念,并导致了古细菌的建立. 3.建立16 S r RNA系统发育树* a）使生物进化的研究范围真正覆盖所有生物类群；* 传统的生物进化研究,主要基于复杂的形态学和化石记载,因此多限于研究后生生物（metazoa）,而后者仅占整个生物进化历程的1/5* b）提出了一种全新的正确衡量生物间系统发育关系的方法；* c）对探索生命起源及原始生命的发育进程提供了线索和理论依据；* d）突破了细菌分类仅靠形态学和生理生化特性的限制,建立了全新的微生物分类、鉴定理论；* e）为微生物生物多样性和微生物生态学研究建立了全新的研究理论和研究方法,特别是不经培养直接对生态环境中的微生物进行研究.3、 16S rRNA(16S rDNA) 寡核苷酸的序列分析 * 首先, 16S rRNA 普遍存在于原核生物（真核生物中其同源分子是 18S rRNA ）中. rRNA 参与生物蛋白质的合成过程,其功能是任何生物都必不可少的,而且在生物进化的漫长历程中保持不变,可看作为生物演变的时间钟.其次,在 16S rRNA 分子中,既含有高度保守的序列区域,又有中度保守和高度变化的序列区域,因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究.第三, 16S rRNA 的相对分子量大小适中,约 1 540 个核苷酸,便于序列分析.因此,它可以作为测量各类生物进化和亲缘关系的良好工具. 分离菌株 16S rRNA 基因* .从平板中直接挑取一环分离菌株细胞 , 加入 100μL 无菌重蒸 H 2 O 中 , 旋涡混匀后 , 沸水浴 2min, 12 000r min -1 离心 5min, 上清液中即含 16S rRNA 基因,可直接用于 PCR 扩增.分离菌株 16S rRNA 基因的 PCR 扩增和序列测定的一般步骤为： 16S rRNA 基因的 PCR 引物： 5'-AGAGT TTGAT CCTGG CTCAG-3' ； 5'-AAGGA GGTGA TCCAG CCGCA-3' .扩增反应体积 50 m L ,反应条件为 95 ℃预变性 5min , 94 ℃变性 1min , 55 ℃退火 1min , 72 ℃延伸 2min ,共进行 29 个循环, PCR 反应在 PTC-200 型热循环仪上进行.取 5 m L 反应液在 10g L -1 的琼脂糖凝胶上进行电泳检测. PCR 产物测序可由专门技术公司完成. 比对分析* 测序得到 分离菌株 16S rDNA 部分序列,此序列一般以 *.f.seq 形式保存,可以用写字板或 Editsequence 软件打开,将所得序列通过 Blast 程序与 GenBank 中核酸数据进行比对分析 ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast ) ,具体步骤如下：点击网站中 Nucleotide BLAST 下 Nucleotide-nucleotide BLAST [blastn] 选项,将测序所得序列粘贴在“ search ”网页空白处,或输入测序结果所在文件夹目录,点击核酸比对选项,即“ blast ”,然后点击“ format ”,计算机自动开始搜索核苷酸数据库中序列并进行序列比较,根据同源性高低列出相近序列及其所属种或属,以及菌株相关信息,从而初步判断 16S rDNA 鉴定结果.比对分析* 遗传距离矩阵与系统发育树构建,可采用 DNAStar 软件包中的 MegAlign 程序计算样本间的遗传距离.由 GenBank 中得到相关菌株的序列,与本研究分离菌株所测得序列一起输入 Clustalx1.8 程序进行 DNA 同源序列排列,并经人工仔细核查.在此基础上,序列输入 Phylip3.6 软件包,以简约法构建系统发育树.使用 Kimura 2-parameter 法,系统树各分枝的置信度经重抽样法（ Bootstrap ） 500 次重复检测, DNA 序列变异中的转换和颠换赋于相同的加权值.（二）细胞化学成分的鉴定* 除上述核酸成分外的其它化学成分的测定,是微生物化学分类法的重要内容,主要包括：1.细胞壁的化学成分.2.全细胞水解液的糖型.3.磷酸类脂成分的分析.4.枝菌酸的分析.5. 醌类的分析.6.气相色谱技术的应用.（二）细胞化学成分的鉴定* 微生物分类中,根据微生物细胞的特征性化学组分对微生物进行分类的方法称化学分类法 (chemotaxonomy) .在近二十多年中,采用化学和物理技术采研究细菌细胞的化学组成,已获得很有价值的分类和鉴定资料,各种化学组分在原核微生物分类中的意义见表 细菌的化学组分分析及其在分类水平上的应用 细胞化学成分鉴定的意义* 随着分子生物学的发展,细胞化学组分分析用于微生物分类日趋显示出重要性.细胞壁的氨基酸种类和数量现己被接受为细菌属的水平的重要分类学标准.在放线菌分类中,细胞壁成分和细胞特征性糖的分析作为分属的依据,已被广泛应用.脂质是区别细菌还是古菌的标准之一,细菌具有酰基脂 ( 脂键 ) ,而古菌具有醚键脂,因此醚键脂的存在可用以区分古菌.霉菌酸的分析测定己成为诺卡氏菌形放线菌分类鉴定中的常规方法之一.鞘氨醇单胞菌和鞘氨醇杆菌等细胞膜都含有鞘氨醇,因此鞘氨醇的有无可作为此类细菌的一个重要标志.此外某些细菌原生质膜中的异戊间二烯醌,细胞色素,以及红外光谱等分析对于细菌、放线菌中某些科、属、种的鉴定也都十分有价值. （三）数值分类法* 数值分类法亦称统计分类法,是在约200年前与林奈同代人M.Adanson (,法国植物学家)发展的分类原理基础上借助于现代的电子计算机技术而发展起来的.数值分类的基本步骤为：（1）计算两菌株间的相似系数；（2）列出相似度矩阵；（3）将矩阵图转换成树状谱.数值分类的基本步骤数值分类法* 又称阿德逊氏分类法
.它的特点是根据较多的特征进行分类,一般为 50 ～ 60 个,多者可达 100 个以上,在分类上,每一个特性的地位都是均等重要.通常是以形态、生理生化特征,对环境的反应和忍受性以及生态特性为依据.最后,将所测菌株两两进行比较,并借用电子计算机计算出菌株间的总相似值,列出相似值矩阵 ( 图 14-5) .为便于观察,应将矩阵重新安排,使相似度高的菌株列在一起,然后将矩阵图转换成树状谱 (dendrogram) ,再结合主观上的判断 ( 如划分类似程度大于 85 ％者为同种,大于 65 ％者为同属等 ) ,排列出—个个分类群. 数值分类法的优越性* 数值分类法的优越性在于它是以分析大量分类特征为基础,对于类群的划分比较客观和稳定；而且促进对细菌类群的全面考查和观察,为细菌的分类鉴定积累大量资料.但在使用数值分类法对细菌菌株分群归类定种或定属时,还应做有关菌株的 DNA 碱基的 G + Cmol% 和 DNA 杂交,以进一步加以确证.
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吴昌硕字画鉴定，
古代书画中经常碰到这两种情况：一是有些作品作者自书名款或钤有印章；二是有些作品没有款印。从古书画的鉴定而言，前者是辨真伪，而后者则为明是非，二者是有区别的。有名款印记的，要辨真伪，无印款的书画在流传过程中，经后人评定，认为它是某代或某人所作，这种评定，有的是正确的，有的是错误的，正确的当然可信，评定错了的，就不可信，因此还需要我们去辨别这些评定的是或非。这就叫明是非。有些没有被评定过的，我们还要重新去鉴别和评定，但这仅存在是的问题，而不存在非的问题。虽则如此，也属于明是非的范畴。
以上说的是一般情况，还有一些特殊情况。第一种情况是，虽为无款印仍存在着辨真伪。主要是指人们仿元以前的字、画、染旧所造的假古董。例如日本《爽籁馆欣赏》画集影印出来的几幅无作者名款的所谓五代曹仲元、韩虬、左礼的“菩萨”、“水官像”轴，是晚清人可能出于广东地区所造的伪作。画上又仿书了宋徽宗赵佶的瘦金体标题，说它是某某人所作。对这类假古董主要是从仿古做旧方面来辨识它的作伪的实质。因此，尽管它没有款印，但鉴别它仍是一个辨真伪的问题。而对于鉴别伪作的赵佶标题，又存在着明是非的问题了。
第二种情况是，虽有款记却
古代书画中经常碰到这两种情况：一是有些作品作者自书名款或钤有印章；二是有些作品没有款印。从古书画的鉴定而言，前者是辨真伪，而后者则为明是非，二者是有区别的。有名款印记的，要辨真伪，无印款的书画在流传过程中，经后人评定，认为它是某代或某人所作，这种评定，有的是正确的，有的是错误的，正确的当然可信，评定错了的，就不可信，因此还需要我们去辨别这些评定的是或非。这就叫明是非。有些没有被评定过的，我们还要重新去鉴别和评定，但这仅存在是的问题，而不存在非的问题。虽则如此，也属于明是非的范畴。
以上说的是一般情况，还有一些特殊情况。第一种情况是，虽为无款印仍存在着辨真伪。主要是指人们仿元以前的字、画、染旧所造的假古董。例如日本《爽籁馆欣赏》画集影印出来的几幅无作者名款的所谓五代曹仲元、韩虬、左礼的“菩萨”、“水官像”轴，是晚清人可能出于广东地区所造的伪作。画上又仿书了宋徽宗赵佶的瘦金体标题，说它是某某人所作。对这类假古董主要是从仿古做旧方面来辨识它的作伪的实质。因此，尽管它没有款印，但鉴别它仍是一个辨真伪的问题。而对于鉴别伪作的赵佶标题，又存在着明是非的问题了。
第二种情况是，虽有款记却是个明是非的问题。主要是指古代勾填摹仿的一部分作品，以书法为多，当时只是为了搞一个副本以广流传，并不是存心做假。如唐代《万岁通天摹王氏进帖》，它是原底破损残缺笔画处，用墨线圈出示意，这正表明它不是存心作伪。对于这类东西，我们只要了解它确是唐摹本即可。至于原底的真伪，又当别论。因此，虽系有款人法书，但仍是一个明是非的断代问题。
第三种情况是，一件东西之中，辨真伪与明是非杂糅在一起。如旧题为柳公权书的《兰亭诗》卷，它本身是无款的真唐人书，被后人乱定为柳笔，题跋和收藏印也有真有伪，碰到这种情况时，要作具体的分析，不能笼统地说它是真是伪，或是或非了。
以上说明，要做到“辨真伪与明是非”’不是一件容易的事，需要逐步积累经验，鉴别古书画的经验丰富了，才能比较有把握。
2．真伪与优劣
在鉴别古书画的真伪和断代时，要不要从艺术角度去差别，衡量它们艺术水平的高下呢？就鉴定工作本身来说，所要判别的，首先应从作品的艺术形式手法，如用笔、用墨、用色、章法（构图）等等最基本的东西着手，舍此别无它途。但是那些高手作的书画，其艺术手法、笔墨技巧的确要比一般画家高人一等。作伪者是摹学不到的。有些书画家在世的时间长，而作品的艺术技能和水平又是不断发展的，因此，从艺术技巧优劣的角度上来断真伪，就必须将某一书画家的作品按其艺术的发展情况分别定出几个标准，而不能笼统地死守一种标准来衡量。否则，就会把不成熟的早期作品看成赝品。
作品的优劣标准，是一个比较难以说清楚的问题。世俗之人往往停留在“工”与“拙”的判断水平上，以为“工能”总是优，“生拙”应是劣。绘画画得像真，且技巧又熟练，都可以说是工。但是专讲像真，缺乏艺术独创，那只不过是标本挂图而已；技巧熟练到了油滑的程度，反而走向反面变为庸俗可厌。书法写得四平八稳是一种起码的条件，虽工却不能称为优美的“法书”。对于古代的“文人画”就不能片面讲状物是否逼真，刻划是否细致。他们往往追求有生拙之趣，而不以工能见长。书法中也有如此情况。这些问题很复杂，何者为优，何者为劣，是很难用抽象的名词解释清楚的，要得到正确的判别，只有在大量的作品中反复阅看才能逐步熟悉它，得到比较明确的认识和理解。
进一步说，鉴定与鉴赏是两码事，绝不能把好坏和真假等同起来，简单地认为好即真，坏即假是会犯错误的。如清王?早、中年做了许多宋元人的伪本，那时他的绘画技巧已相当高了，其仿宋元人的伪作，不一定在宋元人之下，如果不研究他的仿作像不像那些被仿的作品，单从画得好不好、技巧高不高这一方面去着眼，就难免以为是宋元人的真迹了。还有一些本来是艺术上的高手，因为偶然的原因，遇到不利的客观条件，如纸笔工具不好，或下笔时精神疲乏，兴趣欠浓等等，就不能保持原有的水平；不过，这种下降总不会距离原有的水平太远，或者仅仅是局部的瑕疵。碰到这样的作品时，我们必须小心谨慎地从各方面去观察研究，弄清其原因，作出正确的判断，否则就容易误认为是伪作了。还有一些本来不是书画名家，而是社会上知名人士的作品，其艺术水平本来不高，他们的作品可能有文物价值，但在艺术上并不重要。还有一些画家不大会写字，他们的款字往往写得很拙劣。诸如此类，更不能单从艺术上的优劣来评论其真伪了。但也要防止过分宽大，处处原谅。如题款为某一名家的作品，仅有小部分较好，而大部分则一无是处，把它定为真迹，那也是不对的。事实上，过严、过宽都是心目中没有正确的标准和样板的缘故。这样一来，真伪、是非的正确判断就无从产生了。鉴别古书画的大敌是偏爱、偏恶。如果只凭自己的主观标准，喜欢的就是好的，不喜欢的就是坏的。以此态度来判别真伪，就很难得出正确的鉴别结论。得不出正确的鉴别结论，就会使国家的文物受到损失，甚而达到不可弥补的地步。因此，我们在鉴别古字画中，必须防止过宽过严和偏爱偏恶的现象发生。
书画鉴定虽有以上两方面的内容，但是分辨它的真伪和是非，更是这项工作的第一关。评价作品的艺术高低和精粗美恶，固然是鉴定工作中的一部分，可它与第一项内容相比，却处于从属的地位，所以在这里，着重点是在“辨真伪和明是非”，不在于书画的精粗与优劣。在鉴别的范畴中，我认为真伪第一，优劣第二。批判优劣，是在真伪判定之后，而不是判定之前，亦即认识优劣，不可能不在认识书画本身真伪之后。
历代书画之有伪作，已经有相当久远的历史了。据北宋米芾的《书史》、《画史》所记，在他前代的书法和绘画名家的作品，几乎都有伪作，而且数量相当大。如李成，伪造的作品竟多至三百本，他慨叹地要作无李论。这些记录，仅是米芾一人所见，事实上还不仅限于这个数字。这些伪作，对书画的真品说来，造成了纷乱局面，因而书画要通过鉴别来达到去伪存真。说明书画鉴别的历史是与书画作伪的历史相应地发展起来的。
在旧社会，古代书画大多数为封建帝王、官僚、地主和资产阶级所占有，他们通常从个人爱好出发，有的甚至将古书画作为个人争强斗富的工具。因此他们对古书画的鉴定有时就不能从客观实际出发，得不出科学的结论。他们所写的有关书画鉴定和评论的各种著作中虽有许多经验和资料可供我们参考。但这些经验和资料大都是零散的，而且其中往往存在着许多谬误和不实之处。由于阶级和时代的局限，在中国封建社会里，没有人写出比较系统、比较全面的书画鉴定专著。
传统的鉴别方法主要是把印章、题跋、著录、别字、年月、避讳、款识作为书画的主要依据。这种鉴别方法的缺点，在于抛弃了书画的本身，而完全以利用书画的外围为主，强使书画本身处于被动地位。始终没有意识到这种方法所应用的依据，仅仅是旁证，是片面的，是喧宾夺主，因而也是非常危险的。因此，这个鉴别方法，不但不能解决矛盾，相反地会引起更严重的矛盾，而终于导致以真作伪以伪作真的后果，其结论是书画不可认识论。事实上，旁证的威力，对书画本身的真伪，并不能起决定性的作用。因为它与书画的关系币是同一体，而是从属于书画，它只能对书画起着帮衬的作用。而且有时它并不能起作用甚至起反作用。它只能在对书画本身作了具体分析之后，才能得知在它的特定范围内能否起作用与所起作用的程度。因此书画本身，才是鉴别的主体，最确切的根据，也只有这个根据独立起来，才有可能利用一切旁证。否则这些旁证，纵然有可爱之处，却都是带有尖刺的玫瑰。把书画本身的客观条件和书画的外围条件统一起来，再用唯物辩证法的观点去进行分析、研究，就是本书所要阐述的古书画鉴定的理论和方法。
鉴别古书画必须采用物物对比，主要在于对实物的目鉴，即凭视觉观察并识别某一类作品的艺术表现的特征，画和字的时代风格和书画家的个人风格。但是目鉴必须有一个先决条件，即：一人或一时代的作品见得较多，有实物可比，才能达到目的，否则是无能为力的。因此常常还需要结合文献资料考订一番，以补“目鉴”的不足。某一画家传世作品较多，能作充分的对比时，目鉴的确能够解决问题，明清人的作品传世较多，有比的条件，不考订也没有什么关系，当目鉴无所依傍，比较的条件不充分时，考订也可能起主导作用。但是考订要靠目鉴来判别哪些书画是“依样画葫芦”的摹、临本，还是没有依傍的凭空的伪造本。在这一基础上才能进一步加以考订和探索，达到比较全面的理解和认识，否则考订也无济于事。所以考订次于目鉴。实际上，目鉴与考订是相辅相成。缺一不可。考订，大半要翻检文献。但不要忘记，文献本身也会有错误，谨防上当。
书画鉴定中印章的识别
印章和字画是古玩中最难鉴别的。
收藏印章，有人是以石为主，有人是以印为主，二者皆可。要想收藏到一方好印，印章老，名家刻是首选。当然，章石的好坏，也是考虑的因素之一。
鉴别字画要懂得笔墨功夫，鉴别印章要识别篆法、刀法、章法、时代流派、书法功底等等。
藏印，主要应从篆刻艺术考量;一个收藏印章的人，对书法艺术要有精深的研究，否则很难对篆刻的好坏有正确的理解。
旧的印章，轮廓圆润，表面光滑，自然的磨损无人为的痕迹，经久的风化留下历史的迹象。篆刻线条表面圆滑，因用久或自然风化后笔划圆转，印底(即笔划间的空隙)无明显刀痕。表面干净，无人为的脏东西。
好的篆刻，篆法合度，章法合理，刀法合适，边款的真草隶篆皆有出处。大家显其风格，小家有其特点。决非故弄玄虚、笔划飞扬、虚张声势、愚弄外行。
印章怎样断代?深知印史尤为重要。知道什么时代、什么风格，审时度势，方可明辩是非。一般战国古玺及秦汉印多为铜印，明清印多为石印。铜印多为铸印，石印多为刻印。古玺的风格奇绝险峻，汉印的风格朴茂雄浑，明清流派印的风格亦各异。明代文彭的秀润，何震的猛利，清代丁敬的雄健高古，邓石如的风健婀娜，吴让之的圆转飘逸，赵之谦的多姿多彩，黄土陵的挺劲秀雅，吴昌硕的古朴浑厚。近代齐白石的雄强猛烈，来楚生的奇险苍茫等等。
名家不会作假，作假决非名家。只有那些半桶水的人，仿冒名家之作，从中渔利。时下作假手段繁杂，花样百出，技术高明，以假乱真，综述如下，以供警惕。
假冒名家，牵强附会。有新石新刻、旧石新刻、旧印补款、旧款补印。这些要从作者的风格、特点去认真审视，只有明眼人方可看出破绽，不熟知篆刻三昧的人很难理解。书法篆刻水平不高，决假无疑。
印章仿旧，手法多样。故意敲损、打破棱角、烟熏火烤、茶煮药浸、涂胶抹油(用黑皮鞋油沾灰、土等涂搽)、抛光打磨(在抛光机里抛光，用棕刷打磨刀口)、印泥沾灰(在盖印后往空隙间擦灰)等等。只要看上去有上述任何一种情况或者油垢满面、胶泥缠身，定假无疑。
印文杜撰，漏洞百出。仿冒者往往水平不高，时有破绽，如印文篆错、正反不清、排列相反、反字正刻等等，均是伪作。
18年孙像背三年嘉禾，伪币。
从民国初年起，国人皆感到使用袁像币不是很合适，于是国民政府委托国外的铸币厂代做了多款孙像银元，这批银元都是样币，铸造量极少。...
应该是袁大头吧 可能就值几百元吧
大洋洲岛国图瓦卢(Tuvalu)发行的鸟类邮票，详细资料待查。市场散票价每枚1元。
①观光泽：真玉器无论半透明或不透明，都有温润光泽，内部夹有少量杂质或呈棉絮状花纹均属正常；假玉器色泽干枯，灰暗呆板无灵气，有的还有气泡。
②测硬度：用刀刻、刮...
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