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如何检测Rh血型？
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如何检测Rh血型？
官方公共微信镜。１．２方法：
１．２．１柱凝胶法按试剂盒操作说明书进行。１．２．２抗人球蛋白法按《临床检验操作规程》第二版的操作方法进行。
１．２．３聚胺法按如下操作步骤进行：
１．２．３．１血型ｌｇＭ抗体的灭活：在预置有０．４ｍ１２一巯基乙醇试剂并预温到３７℃的有盖离心管中加入待检血清０．４ｍｌ，加盖，３７℃水浴６０分钟，使血型ｌｇＭ抗体降解完全。
１．２．３．２
稀释标本：取小试管在试管架上排成２
排，每排８支，第一排标记为Ａ１一Ａ８，每只管中加入低离子溶液０．２ｍｌ，第二排标记为Ｂ１一Ｂ８，不加低离子溶液。在第一排第１管中加入２一巯基乙醇处理后血清（１：ｌ稀释）０．２ｍｌ，混合均匀，吸出０．３ｍｌ，加０．１ＩＩｌｌ于第二排第１管中，剩余的０．２ｍｌ加入至第一排第２管中，混合均匀，吸取０．．３ｍｌ按以上方法作倍比稀释至第８管，稀释度分别为ｌ
１２８、ｌ
２５６、ｌ
１．２．３．３在标记为Ａ的每管中加入２％Ａ型红细胞悬液５０ｕｌ，在标记为Ｂ的每管中加入２％Ｂ型红细胞悬液５０ｕｌ，每管中再加入低离子溶液０．６ｍｌ，混合均匀，３７℃水浴ｌＯ分钟，再加入凝聚胺试剂２滴，混匀，３４００ｒｐｍ离心１０秒中，倾去上清液，轻摇动试管，应出现显著的凝集现象，此时再加入复恳液３滴，轻轻摇动试管观察凝集是否消失，如凝集消失，则试验阴性，血清中无免疫性血型抗体存在；如放置５分钟后，凝集仍不消失，则试验阳性，证明血清中有免疫性血型抗体存在，出现凝集反应的血清最高稀释度即为该标本的免疫性血型抗体的效价。
１．２．３．４如为测定Ｒｈ血型的免疫性抗体，则取小试管８支，分别标记为Ｒｌ—Ｒ８，在Ｒ２一Ｒ８的小试管中分别加入低离子溶液１００ｕｌ，在Ｒ１管中加入处理后血清１００ｕ１．在Ｒ２管中加人处理后血清１００ｕｌ，混匀，吸出１００ｕｌ，加入至Ｒ３管中，以此倍比稀释后，各管加入２％Ｒｈ阳性０型红细胞悬液５０ｕｌ，低离子溶液０．６ｍｌ，混合均匀，３７℃水浴１０分钟，凝聚胺试剂２滴，混匀，３４００ｒｐｍ离心１０秒中，倾去上清液，剩余约０．１ｍｌ液体，轻摇动试管，应出现显著的凝集现象，此时再加入复悬液２滴，轻轻摇动试管观察凝集是否消失。如凝集消失，则试验阴性，血清中无免疫性血型抗体存在；如放置５分钟后，凝集仍不消失，则试验阳性。证明血清中有免疫性血型抗体存在，出现凝集反应的血清最高稀释度即为该标本的免疫性
血型抗体的效价。ＲＩ．Ｒ８的滴度分别为１
１２８、１
１．２．３．５室内质控：每批试验均应做阳性、阴性对照试验作为该批实验的室内质控，只有当阴、阳性对照实验的结果在质控范围内．该批结果才可发出，如对照试验不符要求，则结果不可发出。１．２．４统计方法：Ｘ２检验。
聚胺法测定孕周大于２８周的孕妇血清１８６
份，检出免疫性抗Ａ、抗Ｂ血型抗体，检出阳性标本４８份。阳性率：２５．８％，其中效价等于或大于１３２
标本１１份，检出率为５．９％。
２．２分别用凝聚胺法、抗人球蛋白法、微柱凝胶法三种方法对同一标本进行ＩｇＧ抗Ａ、抗Ｂ抗体测定共测定６０份标本，其结果如下。
三种方法禹定∞份标本的结果
三种方法检测的阳性率没有显著性差异。２．３
对１８例母婴血型不合发生ＨＤＮ的病例用凝
聚胺法测定其母亲血清中的免疫性血型抗体ＩｇＧ，其中１例为Ｒｈ血型不合，其它为ＡＢＯ血型不合，检出抗体效价＞１
３２的标本ｌＯ例，抗体效价１
标本６例，抗体效价ｌ８标本２例。与新生儿的溶
血三项检测结果完全相符。
２．４用凝聚胺法对购买的含抗ＲｈＩｇＧ、ＩｇＭ的标准抗血清进行测定，其ＩｇＧ的抗体效价为１
用凝聚胺法对２０例无输血史的健康０型男
性的血清进行免疫性抗Ａ、抗Ｂ体测定，２０例标本均为阴性。
用凝聚胺法对６例保存于冰箱中的阳性标本
分别测定３次，三次测定结果完全相符。２．７取凝集效价抗Ａ为ｌ
１２８，抗Ｂ为１
性Ｏ型血清与２一巯基乙醇试剂在３７℃作用１０、２０、３０分钟均出现明显盐水凝集现象，作用４０分钟抗Ａ出现肉眼可见微弱凝集现象，抗Ｂ未见凝集现象；抗人球蛋白法的结果与盐水介质结果相同，用凝聚胺法无论是抗Ａ或是抗Ｂ均可见微弱凝集现象。作用５０分钟抗Ａ肉眼未见凝集，但显微镜下可偶见微弱凝集的红细胞，抗Ｂ在镜下或肉眼观察亦未见凝集；抗人球蛋白法的结果与盐水介质结果相同，用
坚！！至型望坠翌！！堡兰堡！！！竺！竺！型！！！！竺！！！些！！坠：！堡兰丝墅皇堕堕！Ｑ塑主墨垫童蔓！塑
醇试剂也要３７℃预温完全溶解并混匀后方可使用，否则灭活效果欠佳，出现假阳性结果。
凝聚胺法在抗Ａ侧出现微弱凝集；作用６０、８０、１００、１２０分钟无论是抗Ａ或是抗Ｂ，盐水介质法、抗人球蛋白法、凝聚胺法均未见凝集现象，显微镜下亦无凝集的红细胞可见。重复实验结果相同。
２一巯基乙醇见光易分解，且易挥发，所以配
制后应加盖密封、避光、冰冻保存，以防止试剂变质，出现灭活ＩｇＭ不理想的结果。同时２一巯基乙醇易挥发且有难闻的气味。故配制试剂或是进行实验操作时，最好是在有通风装置的地方进行。
３．５凝聚胺法具有操作简单．省时，敏感性亦高于抗人球蛋白法，影响因素相对较少，试剂成本低等优点。根据本法对阴性、阳性标本的重复检测情况及室内质控结果分析，本方法结果稳定，重复性好，可用于临床免疫性血型抗体的检测。
３．１根据三种方法对同一标本测定的结果分析，三种方法的检出免疫性抗Ａ、抗Ｂ血型抗体的结果无显著性的差异。
３．２凝聚胺技术使用不当，或是用２一巯基乙醇处理血清不当而导致假阳性结果的情况时有发生，从而使免疫性血型抗体的阳性率及抗体滴度偏高，导致临床上的误诊及对结果的不信任。根据对２一巯基乙醇灭活１９Ｍ血型抗体的最佳时间研究，用２一巯基乙醇灭活ＩｇＭ血型抗体的时间在５０分钟以下时，就有可能造成灭活不彻底的现象，从而导致假阳性结果的出现。从实验结果看，以灭活６０分钟最为适宜，符合实验要求，又能最大限度地节约时间。正确地使用２一巯基乙醇处理血清是保证实验结果准确的前提条件，这是在实验中值得高度重视的问题。
［Ｉ］杨世明，杨枨林．陈莉．凝聚胺试验与常用检测不完全抗体方法的
敏感性比较．第四军医大学学报，２０００，２１（４）：６４—６５．
［２】容伯芬．凝聚胺在交叉配血和不完全抗体检测的使用评价．国际
医药卫生导报，２００４，１０（１８）：１４６—１４７．
［３］乍影林．中华医学检验全书．北京：人民卫生出版杜，１９９６：４３４．［４］叶应妩，王毓三．全国临床检验操作规程，第二版．南京：东南大学
出版社．１９９７：１０１—１０２．
配制２一巯基乙醇试剂的磷酸盐缓冲液因盐
［５】刘达庄．免疫血液学．上海：上海科学技术出版社．２（）０２：２１７—２２５．［６］李勇．扬贵贞．人类红细胞血型学实用理论与实验技术．北京：中
斟科学技术出版社．１９９９：２８８—２８９．
［７］廉维．杨世英．魏庭萱，等．手工凝聚胺技术在新生儿溶血病检测
中的应用探讨四川Ｉ医学，２００４，２５（６）：６２７—６２９．
浓度高，易析出结晶，而导致浓度甚至ＰＨ的改变。所以在配制２一巯基乙醇试剂时应将磷酸盐溶液置３７℃完全溶解后方可配制。同时在使用２一巯基乙
（上接８０页）
肾组织病理上可见肾小球细胞数增多，伴不同程度的新月体形成，大量炎细胞浸润，肾血管坏死性炎症［４］。国外有较多的文献报道，ＡＮＣＡ阳性疾病的治疗多是强化的糖皮质激素和细胞毒药物，预后较差。可见，ＡＮＣＡ阳性的肾小球疾病不同于ＡＮＣＡ阴性的肾小球疾病，因此，ＡＮＣＡ检测对肾脏疾病在诊断和治疗上有重要的意义。
总之，由于ＡＮＣＡ抗体的发现，使ＷＧ等疾病早期诊断成为可能，现普遍公认ＡＮＣＡ检测业已成为国际上通用的本类疾病敏感而特异的血清诊断工具。关于ＡＮＣＡ的发生情况和临床意义，还有待于更加广泛和深入的研究，鉴于ＩＩＦ法只能检出和区分Ｃ—ＡＮＣＡ和Ｐ—ＡＮＣＡ这两种抗体，而不能准确区分和表达所属抗原，故，若用抗原特异性酶联免疫
吸附法作为确证实验更好，随着科技的进步。ＡＮＣＡ的检测将为临床疾病的诊断、鉴别诊断及病情活动、治疗有着更重要的意义。
［Ｉ］陈燕．何晓虎．抗中性粒细胞胞浆抗体与血管炎［Ｊ】．中华内科杂
志。１９９４．３３（１０）：７０７—７０９．
［２】ＦａｌｋＩｕ．ＪｅｎｎｅｔｔｅｃＪ．Ａｎｔｉｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ
ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ
ａｎｔｏａｎｔｉｂｏｄｉｅｓｖａｓｃｕｌｉｏｉｓ
ｉｄｉｏ－Ｍｅｄ。
ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｆｏｒｍｙｅｌｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅｉｎｌｍｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｓｙｓｔｅｍｉｃ
ｐａｔｈｉｃ
ｎｅｅｒｏｔｉｚｉｎｇａｎｄ
ｃｒｅｓｃｅｎｔｉｃ
ｇｌｏｍｅｍｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ［Ｊ】．ＮＥｒＩｇＩＪ
１９８８。３１８：１６５１
［３】尹广，孙凯植周翟抗中性粒细胞胞浆抗体识Ｓ１的抗原物质［Ｊ］．肾脏病与透析移植杂志．１９９６．５（１）：３３—３５．
［４】孙凯，擎磊石．抗中性粒细胞胞浆抗体滴度检测对微型动脉炎肾
损害活动性的诊断价值［Ｊ］．中华肾脏病杂志，１９９７．１３（６）３５９，
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