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反硝化菌DNF409中硝酸盐还原酶基因敲除的研究
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硕士学位论文
pTD_hBDNF融合蛋白的表达与生物活性测定
ofPTD-hBDNF
Analysisof释iologic鼬Aetivity
Exp量.它ssion
生物化学与分子生物淖
基因工程与蛋白质工程
目的P罩沪}lB黼F基因的克隆、表达和表达产物的纯化及生物活性测
定。方法先从人血囱细胞中提取基因组总DNA,以基因组总DNA为
模板,罴用PeR技术扩璞人BD鼹全长基因,捶入型pljCl9壤粒泼体,
筛选阳性克隆,经酶切藜定无误后进行滴序;以阳性克隆蓬组质粒
经PeR反应扩增褥P罩沪h∞嚣融合基因,著捶入pUC矿霉载体;然惩
n,42℃诱导表达。重组蛋白经初步复性纯化后,将其加入海马神经
元细胞中进行重缀蛋是的生物活性测定。结果p罩D一滤D滞在大肠杆
菌中的表达主要怒以包涵体的形式存在。细菌的菌体蛋白经SDS—PAGE
P{D吨B蹦F具有鞠显憋兔疫爱盛。复性缝化后靛蛋自覆纯发达蓟了
90%以上,且具有明显的生物活性。结论成功构建了含PTD柏BDNF融
合基因的表达载体,并在大肠杆菌中获彳导表达且对表达产物进行了凌
效的熨性和缝化,得猁了具有生物滔性的融合蛋白。
关键词:猿自转导结构域脑源性神经营葵因子血胞屡障
mep髑l—hB
D_NF瓤sion
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