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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-04-17 00:19 标签： BT纯H

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摘要：为得到较纯的具有活性的囚抗氧化蛋白Peroxiredoxin1 （Prx1 ）本文先用PCR 的方法扩增了人Prx1 的cDNA 序列，然 后将其连接到pET28 表达载体上从而构建了编码全长的人抗氧化蛋白-1 基因的pET28-Prx1 原核表达質粒。经双酶切及测序鉴定后 将表达质粒转入大肠杆菌BL21 （DE3）进行表达并通过SDS和western blot 来鉴定表达产物。随后用Ni-NTA 螯合亲和层析 的方法纯化重组蛋皛并测定该酶的米氏常数，用质粒保护实验鉴定该蛋白其活性最终表达载体经酶切和测序鉴定证实构建成功， 表达产物在SDS和western blot 图的25 kD 左右与prx1 真实的蛋白分子量相符，说明Prx1 蛋白成功表达Prx1 纯化后产量 达到7.59 mg/g 菌体，纯度达到88.50%纯化后的Prx1 在37 ℃和pH 7.4 的条件下催化H O 反应的米氏常数Km 为2.06×10-4 mol/L, 2 2 质粒保护实验表明Prx1 可以保护pUC18 质粒免受氧化损伤。因此Prx1 在大肠杆菌中成功表达并得到较纯的活性蛋白。 关键词：抗氧化蛋白1；重组表达；亲囷层析；蛋白印迹法；氧化损伤；质粒保护实验 文章篇号：14)9-55-59 DOI:

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