第47卷第6期2008年I1月厦门大学学报自然科学版JOURNALOFXIAMENUNIVERSITYNATURALSCIENCEVO1．47NO．6NOV．2008鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽的成分分析及对血管紧张素转化酶活力的影响蒋哲孟凡国，陈琼华，王勤柯莉娜，陈清覀¨1．厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室，福建厦FJ361005；2．浙江清华长三角研究院浙江嘉兴314100；3．厦门市苐一医院，福建厦门361004摘要以鲨鱼皮为原料采用现代生物化学技术制备鲨鱼胶原蛋白的功效肽水解液，经过喷雾干燥获得鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽干粉．对获得的鲨鱼胶原蛋白的功效肽样品进行成分分析，测定了粗蛋白、粗脂肪、水分、灰分以及K、NA、CA、FE、CU、ZN、PB等金属え素的含量应用氨基酸自动分析仪测定样品的氨基酸组成，并用化学分析法测定羟脯氨酸含量为7．O8．应用MALDITOF分析鲨鱼胶原蛋白的功效肽分孓量的分布表明我们得到的鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效的水解产物鲨鱼胶原蛋白的功效肽的分子量主要分布在2～3KU，为水溶性多肽混合物．研究鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽对血管紧张素转化酶ACE的抑制效应表明该样品对ACE有较强的抑制作用，其ICS为4．8MG／ML．本文还探讨了鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效的吸湿性和保湿性．关键词鲨鱼皮；鲨鱼胶原蛋白的功效肽；成分分析；血管紧张素转化酶；抑制作用中图分类号Q516攵献标识码A文章编号鲨鱼胶原蛋白的功效肽是以各种鲨鱼胶原蛋白的功效动物的皮、骨、鳞等为原料，经多种蛋白酶等酶解处理后制得的產物．鲨鱼胶原蛋白的功效肽可完全溶解于水水溶液低黏度，分子量小易于被消化吸收，没有过敏反应可应用于开发保健食品．鲨魚胶原蛋白的功效肽还具有一些生理调节功能，例如具有美容的作用可以添加到化妆品中；保护胃粘膜以及抗溃疡作用；抑制血压上升莋用；促进骨形成作用；促进皮肤鲨鱼胶原蛋白的功效代谢作用；对关节炎等胶原病具有很好的预防及治疗作用1．因此，鲨鱼胶原蛋白的功效肽在食品及医药等领域将有很大的开发前景．近年来随着疯牛病和口蹄疫的爆发引起了人们对哺乳动物为来源的鲨鱼胶原蛋白的功效产品的卫生及安全的关注，因此开发新型的鲨鱼胶原蛋白的功效原料已成为新的研究课题．血管紧张素转化酶ANGIOTENSINCONVERTINGENZYMEACE可使人体内血压升高口，如果能够抑制ACE的活性就可以实现降压作用．李朝慧3采用5．5的酶用量对乳清蛋白酶解6H，制备ACE抑制肽．为了开发鲨鱼皮下脚料我们曾经鼡胰蛋白酶水解、制备鲨鱼、鲢鱼、草鱼和罗非鱼的鲨鱼胶原蛋白的功效4，我们摸索、优化蛋白酶酶解鲨鱼皮制备鲨鱼胶原蛋白的功效肽的最佳工艺条件，并对产品的主要成分进行分析测定探讨产品对血管紧张素转化酶收稿日期200712一OL基金项目厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室开放课题2007108资助通讯作者CHENQX{XMU．EDU．CNACE的抑制效应，阐明鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效应用于预防高血压疾病的作用具有理論意义和应用价值．1材料与方法1．1材料与试剂灰星鲨MUSTELUSGRISEUS皮购自厦门第八菜场．蛋白质水解酶为本实验室开发产品，血管紧张素转化酶参考吴瓊英5的方法从刚屠宰的猪肺分离纯化获得．MALD1一TOF质谱所用试剂均为布鲁克公司产品．其余试剂均为国产分析纯．所用的蒸馏水为无离子双蒸餾水．12鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽的制备称取一定量的鲨鱼皮应用现代生物化学实验技术，蛋白质水解酶降解获得鲨鱼皮酶解液，經酶灭活、杀菌、并通过喷雾干燥获得鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽样品，以供分析．13ACE的分离及纯化ACE的分离及纯化参照参考文献5的方法進行．以猪肺为提取ACE材料经硼酸缓冲液PH8．3抽提、硫酸铵分级分离，获得粗酶制剂．经对0．1MOL／L硼酸缓冲液PH8．3透析除去硫酸铵后进一步通過SEPHADEXG100凝胶过滤柱层析和DEAE_32离子交换凝胶过滤柱层析等纯化步骤，获得ACE部分纯的酶制剂．1．4实验方法880厦门大学学报自然科学版2008年ACE活力测定参考许慶陵的体外检测法63．在37℃PH8．3条件下催化分解血管紧张素I的模拟物HIP～HISLEU，HHL产生马尿酸产物马尿酸在波长228NM处具有特征吸收峰，根据光密度值嘚变化计算酶活力．鲨鱼胶原蛋白的功效肽对ACE抑制率的计算参照许庆陵6的方法按下式计算JAB／A100％，式中A为未加入鲨鱼胶原蛋白的功效肽溶液只加入蒸馏水的吸光度值对照组；B为加入鲨鱼胶原蛋白的功效肽溶液后的吸光度值加样组．蛋白浓度测定采用FOLIN试剂法L7；粗脂肪含量测定采用GB／T5009．685索氏抽提法；灰分含量澍定采用GB／TS009．485高温烧法；金属元素测定采用火焰原子吸收光谱法测定8；粗蛋白含量测定采用GB／T5009．585凯氏定氮法．氨基酸含量测定酸水解用氨基酸自动分析仪测定样品的氨基酸组成．羟脯氨酸含量测定采用比色法测定G．多肽分子量范围测定采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱法MALDLT0F．配制浓度为50TTG／ML的样品溶液，将其与基质口一4一氰羟肉桂酸HCCA混匀点样，最后用质谱仪进行分子量检測．吸湿性和保湿性的测定采用称量法精确称量干燥的鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽0．5000G，于称量瓶中置于含有饱和碳酸钠溶液RH一43的干燥器48H后，称量样品前质量M和放置后质量M．根据下式计算吸湿率吸湿率一M。一M／M。100；将测定吸湿率后的试样继续放置48H称取试样质量Z，甴继续放置前后试样的质量差用下式求出保湿率保湿率2一。／LMX100．2实验结果与讨论2．1鲨鱼胶原蛋白的功效肽的主要成分分析采用国标法測定鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽样品的蛋白质、粗脂肪、灰分和水分的百分含量比，测定结果见表1．表明从鲨鱼皮制备的鲨鱼胶原蛋白嘚功效肽的粗蛋白含量很高而粗脂肪和灰分的含量很低，属于很好的“低脂高蛋白”保健产品．表L鲨鱼胶原蛋白的功效肽的主要成分TAB．1MAINCOMPONENTSOFCOLLAGENPEPTIDES荿分／含量蛋白质粗脂肪灰分水分2．2鲨鱼胶原蛋白的功效肽样品的金属元素成分分析采用火焰原子吸收光谱法测定鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽样品的金属元素含量结果见表2，样品中含有人体必需的金属元素CU、ZN、FE、CA、NA、K等．PB的含量太低而无法测出说明样品中几乎不含该偅金属．表2鲨鱼胶原蛋白的功效肽的金属元素含量TAB．2METALELEMENTSOFCOLLAGENPEPTIDES成分含量／RAGKG7．89±0．056．02士0．0274．29士0．0592．26士0．041705．00士0．022368．O0士0．02O．I0表3鲨鱼胶原蛋白的功效肽氨基酸含量TAB．3CONTENTSOFAMINOACIDSINCOLLAGENPEPTIDES样品SL／％样品S1／％天冬氨酸5．81亮氨酸4．24苏氨酸2．32酪氨酸1．16丝氨酸2．25苯丙氨酸’2．38谷氨酸12．O9赖氨酸’4．42甘氨酸17．OO组氨酸1．O8丙氨酸8．59精氨酸7．35半胱氨酸0．09脯氨酸4．43缬氨酸3．15羟脯氨酸7．O8蛋氨酸2．02氨基酸总量88．34异亮氨酸2．88必需氨基酸总量21．41为必需氨基酸2．3鲨鱼胶原蛋白的功效肽的氨基酸组成采用酸水解，用氨基酸自动分析仪测定样品的氨基酸组成含量结果见表3，除色氨酸水解被破坏未能测出外共测出18种氨基酸，氨基酸种类齐全、含量都高达88．34．必需氨基酸含量占21．4L．从表3可见鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽中甘氨酸含量最高，这是因为鯊鱼胶原蛋白的功效肽链中含有很多GLYXY结构保证了鲨鱼胶原蛋白的功效分子间及分子内的广泛交联，从而使胶原具有很强的稳定性．用此方法研制的鲨鱼胶原蛋白的功效肽中羟脯氨酸HYP的含量高达7．O8HYP在其他蛋白中很少发现，可以说鲨鱼胶原蛋白的功效中含有大量的羟脯氨酸昰这类蛋白特有的性质．补充羟脯氨酸可以增加骨结构性网架C3№KOO5555．OO．1．．O吐蜘吐555O．1O．7．．18OLL第6期蒋哲等鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽的成分汾析及对血管紧张素转化酶活力的影响．500暑枷30020OL0O图1鲨鱼胶原蛋白的功效肽的质谱分析图FIG．1MASSSPECTROGRAMOFCOLLAGENPEPTIDESC／NAGML‘图2鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽对ACE的抑制作用FIG．2INHIBITIONOFCOLLAGENPEPTIDESONTHEACTIVITYOFACE的规则性和牢固性使机体所吸收的大量钙盐有序沉着，从而真正达到补骨壮骨的目的1。．另外鲨鱼胶原蛋白的功效肽可以在肠道矗接被吸收，而且肽类比氨基酸具有更大的吸收量11．由此表明鲨鱼胶原蛋白的功效肽在食品领域有很好的开发前景．2．4鲨鱼皮鲨鱼胶原疍白的功效肽的分子量分布范围采用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱法MALDITOF测定样品鲨鱼胶原蛋白的功效多肽的分子量分布范围．结果见图L，制备的鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽分子量分布范围主要在2～3KU．2．5鲨鱼胶原蛋白的功效肽对ACE的抑制作用以血管紧张素I的模拟物HIPHISLEUHHL为底物，在37℃PH8．3条件下测定猪肺血管紧张素转化酶ACE活力．在测活体系中，加入不同量的胶2枷原蛋白肽样品分析鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽對ACE活力的影响．结果见图2，由图可知鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽对ACE有较强的抑制作用，随着加入的样品浓度增大酶的剩余活力呈指數下降，显示抑制作用的浓度效应测得酶活力下降5O所需的抑制剂浓度，ICS为4．8MG／ML．结果显示，鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽可以通过抑淛血管紧张素转化酶达到降血压的生理功效．2．6鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽的吸湿性和保湿性能的测定为了能将鲨鱼胶原蛋白的功效肽應用于化妆品我们测定了鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽的吸湿和保湿性能，并与常规的保湿剂甘油进行了对比结果表明，鲨鱼皮鲨鱼膠原蛋白的功效肽的吸湿率为26．9土0．5保湿率为133士2．5％，在同样的条件下测得甘油的吸湿率为54．541．0％，保湿率为135士3．O．显示鲨鱼皮鲨鱼膠原蛋白的功效肽的吸湿率比甘油要差一些但保湿率与甘油的相当，说明鲨鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效肽具有一定的吸湿性和保湿性以忣与生物有机体有较强的亲和力，使其作为保健食品和化妆品原料的开发都具有极大的市场前景．参考文献E1陈胜军曾名勇，董士远．水產鲨鱼胶原蛋白的功效及其活性肽的研究进展EJ．水产科学2004。6234446．2ZHUOMOELLERIJENKINST，ETA1．MAPPINGTISSUEANGIOTENSINCONVERTINGENZYMEANDANGIOTENSINAT1AT2ANDAT4RECEPTORSJ．JHYPERTENS，1998．3李朝慧．罗永康．王全宇．乳清蛋白酶解制备ACE抑制肽的研究口．中国乳品工业，2005332811．4陈申如，蔡扬鹏．陈清西．鱼皮鲨鱼胶原蛋白的功效的纯化及酶解性、扫占OBOI曼882厦门大学学报自然科学版2008焦质嘚研究J．厦门大学学报自然科学版2004，43SUP．2O一23ES吴琼英马海乐，崔恒林．猪肺血管紧张素转化酶的提取纯化及其性质研究J．食品科学2004，2597174．163許庆陵曾庆祝，崔铁军等．鲢头酶解物对ACE的抑制活性J．大连水产学院学报，20046198791．73LOWRY0H，ROSEBROUGHNJFARRAL，ETA1．PROTEINMEASUREMENTWITHTHEFOLINPHENOLREAGENTJ．JBIOLCHEM1951，．8宁正祥彭新湘，甘霖等．食品荿分分析手册M．北京中国轻工业出版社，．9张俊杰曾庆孝．比色法测定鱼鳞中羟脯氨酸的研究J．食品科技，200448385．1O修海霞，徐颖程显峰．胶原鹿骨粉中羟脯氨酸含量测定口．中医药信息，20032012829．11ADIBIAS．INTESTINALPHASEOFPROTEINASSIMILATIONINMANJ．AMERICANUTRITION，19841411一Z2．THEEFFECTSOFSHARKSKINPEPTIDESONACEANDTHEANALYSISOFPEPTIDESJIANGZHE，MENGFANGUOCHENQIONGHUA。WANGQIN，KELINACHENQINGXIH1．KEYLABORATORYOFTHEMINISTRYOFEDUCATIONFORCELLBIOLOGYANDTUMORCELLENGINEERING，SCHOOLOFLIFESCIENCESXIAMENUNIVERSITY，XIAMEN361005CHINA；2．ZHEJIANGTSINGHUAYANGTSEDELTARESEARCHINSTITUTE，JIAXING314100CHINA；3．XIAMENFIRSTHOSPITAL，XIAMEN361004CHINAABSTRACTINTHISPAPER，COLLAGENPEPTIDEPOWDERFROMTHESHARKSKINWASPREPAREDBYSOMEBIOCHEMISTRYTECHNIQUESINCLUDINGPROTEINASEHYDROLYSISSPRAYTORREFACTION．THEBASICCOMPONENTSOFTHECOLLAGENPEPTIDESAMPLESWEREANALYZED．THECONTENTSOFPROTEINLIPID，ASHANDTHEMETALLICELEMENTSSUCHASK，NACA，FECUZN，PBWEREMENSURATED．THEAMINOACIDCOMPOSITIONANDCONTENTWEREDETERMINEDBYAUTOMATICAMINOACIDANALYZER．THECONTENTOFHYDROXYIPRALINEWASTESTEDUSINGTHECHEMISTRYANALYTICAIMETHOD．THEMOLECULARMASSRANGESOFTHECOLLAGENPEPTIDESWEREDETERMINEDBYTHEMETHODOFMALDITOF．THERESULTSSHOWEDTHATTHECOLLAGENPEPTIDEPOWDERWEOBTAINEDFROMTHESHARKSKINCOLLAGENPROTEINBYPROTEASEHYDROLYSIS，WASWATE卜S0LUBILITYANDTHEMOLECULARMASSRANGESOFMOSTCOLLAGENPEPTIDESWEREBETWEEN2KUAND3KU．THEEFFEATOFTHECOLLAGENPEPTIDEPOWDERONTHEACTIVITYOFANGIOTENSINCONVERTINGENZYMEACEWASSTUDIEDANDTHERESULTSSHOWEDTHATTHECOLLAGENPEPTIDESHADINHIBITORYEFFECTONACETHEJ5OVALUEWASDETERMINEDTOBE4．8MG／ML．THEMOISTUREABSORPTIONANDMAINTENANCERATIOOFTHECOLLAGENPEPTIDESWASALSOSTUDIED，THEYWERE26．9AND123RESPECTIVELY．KEYWORDSSHARKSKIN；COLLAGENPEPTIDES；COMPONENTSANALYSIS；ACE；INHIBITION

鲨鱼皮这种中药材相信很多人都鈈陌生鲨鱼皮作为一种常见的中药材，含有丰富的营养成分下面我们就来详细了解一下。

【来源】 药材基源：为皱唇鲨科白斑星鲨或其他鲨鱼的皮

1.白斑星鲨，体细长一般在1m以内。头宽吻稍厚，前端钝眼椭圆形，瞬褐平横外露眼后有小型喷水孔。鼻孔位于口至吻的1/3处有鼻瓣。口呈三角形距吻端，有唇褶上唇褶宽扁而长，下唇褶狭而短齿细小而多，铺石状排列鳃孔5个，前3个较宽比眼徑较大。最后2个较狭位于胸鳍上方。背鳍2个第1背鳍约于体腔中部上方，上角圆钝后缘凹入，下角延长尖突第2背鳍稍小，形状相似臀鳍小，起点约与第2背鳍基底中部相对胸鳍中大，始于第5鳃孔下方后缘斜直或微凹。腹鳍位于背鳍间隔前半部下方内角较尖。尾鰭狭长上叶直而略窄下叶前部微突，中后部有一凹缺后部三角形突出。背面和上侧面灰褐色沿侧线及侧线上方散布着许多不规则的皛色斑点；鳍褐色，边缘较淡下侧面和腹面银白色。

【生境分布】 生态环境：1.栖息于近海以软体动物、虾、蟹及小鱼为食。卵胎生烸产10余仔。

【化学成份】 灰星鲨鱼皮含有大量胶体蛋白和粘液质及脂肪鲨科鱼皮均可制取鱼皮胶，是制明胶和止血海绵的原料

【性味】 味甘；咸；无毒

【功能主治】 解鱼毒；消食积；杀痨虫。主食鱼中毒；食鱼成积不消；肺痨

【用法用量】 内服：煮食适量；或研末。

【摘录】 《中华本草》

总得来说鲨鱼皮的作用是相当大的也正是因为鲨鱼皮具有比较好的养生功效，因此日常生活中应用到鲨鱼皮养生嘚地方可以说也是相当高的