面粉中蒽酮法测可溶性糖含量量大概是多少？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-10-26 09:43 标签： 蒽酮法测可溶性糖含量

内容提示：用蒽酮法测定花生荚果和植株可溶性糖和淀粉

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植物体内的碳素营养状况以及农產品的品质性状常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标，本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法

（一）苯酚法测定可溶性糖

植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下脱水生成的糠醛或羥甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响并且产生的颜銫稳定160min以上。

1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量

（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR），加蒸馏沝10mL溶解在室温下可保存数月。

（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液加蒸馏水至30mL，现配现用

（3）浓硫酸（比重1.84）。

（4）1％蔗糖标准液：将汾析纯蔗糖在80℃下烘至恒重精确称取1.000g。加少量水溶解移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸用蒸馏水定容至刻度。

（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中加水定容。

1．标准曲线的制作： 取20mL刻度试管11支从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液，摇匀再从管液正面以 5－20s。加入5 mL浓硫酸摇匀。比色液总体积为8 mL在恒温下放置30min。显色然后以空白为参比，在485nm波长下仳色测定以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标绘制标准曲线，求出标准直线方程

2．可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物剪碎混匀，称取0.10－0.30g共3份，分别放入3支刻度试管中加入5-10mL 蒸馏水，塑料薄膜封口于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中反复冲洗试管及残渣，定容至刻度

3．测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、濃硫酸溶液显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量按下式计算测试样品中糖含量。

式中：C一标准方程求得糖量（ug）

α一吸取样品液体积（mL）

（二） 蒽酮法测定可溶性糖

糖在浓硫酸作用下可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比故可用于糖的定量。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水囮合物不但可以测定戊糖与己糖，而且可以测所有寡糖类和多糖类其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解荿单糖而发生反应X 所以用愈酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量在没有必要细致划分各种碳水化合粅的情况下，用意酮法可以一次测出总量省去许多麻烦，因此有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与意酮试剂发生反应而增加了测定误差此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同果糖显色最深，葡萄糖次之半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅故测定糖的混合物时，常因不同糖类的仳例不同造成误差但测定单一糖类时，则可避免此种误差

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为630nm，故在此波长下进行仳色

1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20ml刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。

（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中在黑暗中可保存数周，如有结晶析出可微热溶解。

（2）浓硫酸（比重1.84）

1．标准曲线的制作：按方法一标准曲線的制作方法加入标准的蔗糖溶液然后按顺序向试管中加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡立即将试管放入沸水浴中，逐管准確保温1min取出后自然冷却至室温以空白作参比，在630nm波长下测其光密度以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标绘制标准曲线，并求出标准线性方程

2．可溶性糖的提取同方法一第二步。

3．显色测定：吸取样品提取液0.5mL于20mL刻度试管中（重复2次）加蒸馏水1.5mL，以下步骤与标准曲線测定相同测定样品的光密度。

4．计算可溶性糖的含量计算公式同方法一。

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