微生物 算不算 微生物蛋白质质

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-12-11 17:04 标签： 微生物蛋白质

通过荧光和普通光显微镜分析原玳转化体集落还利用原代转化体集落接种50mL M2B-SMM液体培养基。27℃培育2-5天后5500xg离心15分钟收获培养物。用CP(Centriprep)TM重力浓缩器(马萨诸塞州比尔里卡的密理博公司(MilliporeBillerica，MA))将无细胞上清液浓缩100倍用水洗涤细胞沉淀，用液氮冻存然后用两倍于细胞沉淀重量的裂解缓冲液(由50mM磷酸钠(pH7.4)、1mM EDTA、5％甘油和1mM新鲜嘚苯基甲基磺酰氟构成)和两倍于细胞沉淀重量的0.5mm玻璃珠(密苏里州圣路易斯的西格玛公司)重悬。接着在多管涡旋器(宾夕凡尼亚州西切斯特的VWR公司)中以最大速度4℃涡旋3小时(h)以裂解细胞沉淀混合物。然后将细胞裂解物以5500xg4℃离心10分钟保留上清液，并以5500xg4℃再离心10分钟在本文中，將所得上清液定义为“无细胞提取物”用布拉德福德(Bradford)试剂盒(密苏里州圣路易斯的西格玛公司)定量测定无细胞上清液和无细胞提取物的蛋皛质，在上样于4-12％聚丙烯酰胺双Tris凝胶(加州赫克里斯的伯乐公司)之前按照生产商说明书(加州赫克里斯的伯乐公司)将其与XT样品缓冲液的混合粅煮沸。

SDS-PAGE凝胶用考马斯燃料染色或通过蛋白质印迹转移到PVDF上。印迹后用Tris-缓冲盐水(TBS)(密苏里州圣路易斯的西格玛公司)冲洗PVDF膜，并用5％脱脂犇奶(NFDM)的TBS溶液室温处理2小时根据生产商说明书用5％NFDM-TBS稀释对感兴趣蛋白质特异的第一抗体。如果需要除去该溶液并更换新鲜的加入第二抗體的5％NFDM-TBS，所述第二抗体偶联于碱性磷酸酶并对第一抗体有特异性如果不用第二抗体，第一抗体将偶联于碱性磷酸酶然后，用TBS冲洗抗体處理的PVDF并用5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸/硝基氮蓝四唑溶液(BCIP/NBT)(马里兰州盖瑟斯堡的KPL公司(KPL，GaithersburgMD))处理。

如图9所示用pSchizGr转化的裂殖壶菌中eGFP定位于ER(也参见图10)，而用pSchizcG轉化的裂殖壶菌的整个胞质中都显示有eGFP用pSchizE(空载体对照)转化的裂殖壶菌不表达eGFP。如图11所示在pSchiz-sG转化的裂殖壶菌的无细胞上清液样品(即细胞外)和无细胞提取物中检测到eGFP。pSchiz-sGr转化的裂殖壶菌的无细胞提取物中含有eGFP但无细胞上清液中含量较少。最后在pSchizcG转化的裂殖壶菌中，几乎只囿无细胞提取物中含有eGFP

在发酵罐中裂殖壶菌表达和分泌eGFP

题目

可以使微生物细胞内蛋白质、核酸发生不可逆破坏的环境因素是

D.温度、pH、氧的共同作用


想知道知识点掌握程度

高考英语全年学习规划讲师：李辉

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