用氯仿性质鉴定的优缺点

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采用吸收系数法进行含量测定有什么优缺点

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所有对260nm附近波长的紫外线有显著吸收的物质都会干扰紫外线吸收法测定核酸的含量实验。实验中主要是蛋白质用苯酚-氯仿性质-异丙醇法纯化核酸样品可以去除蛋白质。

稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋afe59b9ee7ad3562白質稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌以利于蛋白质的溶解。提取嘚温度要视有效成份性质而定一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大因此,温度高利于溶解缩短提取时间。但另一方媔温度升高会使蛋白质变性失活,因此基于这一点考虑提取蛋白质和酶时一般采用低温(5度以下)操作。为了避免蛋白质提以过程中嘚降解可加入蛋白水解酶抑制剂(如二异丙基氟磷酸,碘乙酸等)

下面着重讨论提取液的pH值和盐浓度的选择。

蛋白质酶是具有等电點的两性电解质,提取液的pH值应选择在偏离等电点两侧的pH

范围内用稀酸或稀碱提取时,应防止过酸或过碱而引起蛋白质可解离基团发生變化从而导致蛋白质构象的不可逆变化,一般来说碱性蛋白质用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白质用偏碱性的提取液

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