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即送15丁当
为什么我跑的电泳ladder会出现拖尾？
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请高人指点：
我这个是NEB的DNA ladder, 条件如图，不知为什么会出现很长的拖尾，请指点一二，不胜感激涕零！
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Run gel at 60 V and less than 70 mA for 2 hours( or let the front of dye running to 3 quater of the gel) then view the DNA on the gel under UV light.
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Thanks a lot!
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明显的电流过大导致的
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帆帆0816 明显的电流过大导致的您能大概说一下为什么这样的拖尾现象是由电流过大造成的吗？感激不尽！自己平时也经常碰到，protocol写着100V电压恒流跑胶，从来没60V跑过
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即送15丁当
我DNA Ladder 跑的电泳有什么问题
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这个帖子发布于13年零37天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我用的是药物诱导癌细胞凋亡，做DNA Ladder（用的是北京鼎国的动物细胞凋亡梯子提取试剂盒）。跑出来的电泳不是一条条带，而是每条很长的拖尾现象，Marker到是出来了。我是按说明书上0。8%的琼脂糖。我用的是60v电压。不知道什么原因？郁闷。说明书上说混合温和是什么意思，我又没用力摇。我还想问收集凋亡细胞时离心时转速多少比较好？谢谢了
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gongyulai 我用的是药物诱导癌细胞凋亡，做DNA Ladder（用的是北京鼎国的动物细胞凋亡梯子提取试剂盒）。跑出来的电泳不是一条条带，而是每条很长的拖尾现象，Marker到是出来了。我是按说明书上0。8%的琼脂糖。我用的是60v电压。不知道什么原因？郁闷。说明书上说混合温和是什么意思，我又没用力摇。我还想问收集凋亡细胞时离心时转速多少比较好？谢谢了（1）“跑出来的电泳不是一条条带，而是每条很长的拖尾现象”： 可能是由于你点样时，时间太长了，导致样品扩散；还有一个原因是你设置的电压太高，最好是2~4v/cm，跑4～6小时比较合适（2）“我是按说明书上0。8%的琼脂糖”：凝胶浓度太低了，把凝胶浓度加大到2％，放心做，没问题的（3）“说明书上说混合温和”：那是怕你混匀太剧烈导致细胞基因组DNA断裂啊，注意很轻轻的混匀（4）“收集凋亡细胞时离心时转速”：我在实验室中是5000rpm，离心5min，我觉得足已祝你好运！
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我也是有问题求教各位高手，我的ladder总是只有一条带，与对照组差别不大，用的是100v,1-1.5h,不知道是不是这个原因？溴酚兰跑到什么位置合适呢？急急请教！！
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mmyycc 我也是有问题求教各位高手，我的ladder总是只有一条带，与对照组差别不大，用的是100v,1-1.5h,不知道是不是这个原因？溴酚兰跑到什么位置合适呢？急急请教！！电压设置太高了啊溴酚兰一般跑到蓝色离胶顶2cm左右把附上我刚刚做的DNA LADDER图象，我用的不是试剂盒，是按照《细胞实验指南》上做的，效果不错啊具体见：/bbs/thread/518411
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非常谢谢。我觉得这里的确是个好地方。我明天再试试。
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我明年准备做
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haha!chujun_hust!
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请问做DNA LADDER时选择处理后细胞多长时间就可以提取细胞DNA比较合适？我看有的文献是处理细胞3天后提取DNA的，是不是时间太长了？
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我觉的根据不同情况吧。如果我是同一浓度不同时间测和不同浓度同一时间应该不一样的。
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lwk2003 请问做DNA LADDER时选择处理后细胞多长时间就可以提取细胞DNA比较合适？我看有的文献是处理细胞3天后提取DNA的，是不是时间太长了？我觉得对于不同药物/不同剂量/不同细胞系,不同接种密度,细胞发生DNA LADDER的时间都不一样,所以最好是每隔12小时,或者24小时测量一次,我是每隔8h做的,连续奋战了3天3夜啊!然后根据跑电泳的结果决定什么剂量/什么时间,DNA LADDER效果最好!
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1kb DNA Ladder Marker 核酸电泳和回收
产品价格&990.00
所属行业其他生物制品
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特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。品牌：百奥莱博产地：国产|进口编号：YBP125规格：50次/100次/200次产品介绍：本产品为即用型产品，已含有1× Loading Buffer，可根据实验需要，直接取6 μl电泳(每1mm点样孔宽度加1.5 μl，如果加样孔较宽，可适当增加上样量)使用方便，电泳图像清晰。本产品中8条带分别为，，，bp，其中4000 bp条带为100 ng/6 μl，其余条带浓度为50 ng/6 μl。产品浓度：0.09 mg/ml产品储存：4°C保存6个月内有效，-20°C保存一年有效。关于1kb DNA Ladder Marker 核酸电泳和回收的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：·RIPA裂解液编号：YBP115 规格：50ml/100ml 产品介绍：RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immuno Precipitation Assay。注意事项o 裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford法测定蛋白浓度，可以选用本公司生产的BCA蛋白定量盒测定蛋白浓度。o 用户使用前需加入蛋白酶抑制剂如PMSF或者根据需要再加入Leupeptin，Aprotinin等其它抑制剂。o 裂解液中SDS 4°C保存易沉淀析出，使用前应该37°C水浴重新溶解完全后回复到室温使用。o 裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4°C进行。产品储存：4°C。1kb DNA Ladder Marker 核酸电泳和回收关键词：1kb DNA Ladder Marker,YBP125,百奥莱博ARB14062 鲑鱼降钙素(SCT)含量检测 Salmon calcitonin,sct ELISA KITARB13988 猪葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)Elisa方法检测 Porcine glucose transporter 2,glut2 ELISA KITARB12560 大鼠脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PL-A2)含量分析 Rat lipoprotein-associated phospholipase a2,lp-pl-a2 ELISA KITBTN131159 荧光素555标记山羊抗兔IgG Goat Anti-Rabbit IgG ,IF555 ConjugateBL1268 PMSF(100mM)PY02-423 &Columbia-MUG琼脂培养基 &100克 &BTN100885 X-Gal干粉 X -Gal PowderARB13350 牛口蹄疫亚1型抗*(&体&)(FMD1-Ab)酶联免疫定量检测 BTN60807 柱式无内毒素质粒DNAOUT Column Endo-free Plasmid DNAOUT1,3,5-三溴苯 Maltose Phosphorylase 626-39-1SJ0748 人中性粒细胞和白细胞分离液鸟嘌呤 PASAM 73-40-5BTN100303 玻璃珠法柱式真*(&菌&)DNAOUT Glassbeads Column Fungal DNAOUTF040401 乙肝表面抗原 HBSAgBTN130512 一站式磁珠法动物mRNAOUT One-Step MAG Animal mRNA Isolation Kit1kb DNA Ladder Marker 核酸电泳和回收关键词：1kb DNA Ladder Marker,YBP125,百奥莱博·Neofectin 脂质体转染试剂编号：YBP141 规格：1ml 产品介绍：Neofectin 是一种新型的脂质体转染试剂，它把阳离子脂质体和聚合物成功的偶联在一起，使用方法简单，可携带大片段DNA，通用于各种类型的裸露DNA，能转染各种类型的细胞，没有免疫原性。在体外基因转染中有很高的效率，并且解决了高细胞毒性的问题，除了具有阳离子脂质体的转染效率高，操作简单、适用范围广、重复性好等特点外，还具有转染效率高、细胞毒性低等特点，是新一代的转染试剂。产品特点：o 成功的将聚合物法和阳离子脂质体法偶联在一起，是一种新型的转染试剂；o 同其它转染试剂对比，拥有更高的转染效率，尤其对难以转染的细胞；o 同其它转染试剂相比拥有更低的细胞毒性水平。产品储存：4-8°C 保存，请勿低温存储。·EASYspin酵母RNA快速提取盒编号：YBP003 规格：50次 适用范围：适用于从酵母中快速提取无基因组DNA污染的高纯度的酵母RNA。本盒按照指示储存12个月不影响使用效果。储存事项：1.所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。2.不合适的储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下（15℃－25℃）进行。3.为避免降低活性，方便运输，提供Lyticase(2500U)为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入0.25ml灭*(&菌&)水溶解配制成10U/μl，因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存，避免反复冻融。4.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。产品介绍：酵母细胞经lyticase处理去除细胞壁后，独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA选择性吸附于离心柱内玻璃纤维膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从玻璃纤维膜上洗脱。产品特点：1.离心吸附柱内玻璃纤维膜全部采用进口世界著名公司特*(&制&)吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产盒膜质量不稳定的弊端。2.不需要使用有毒的苯*(&酚&),氯*(&仿&)等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。3.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。4.基因组DNA清除柱可以有效的消除基因组DNA的污染。5.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。注意事项1.第*(&一&)次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指*(&定&)量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!2.所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12，000 rpm的传统台式离心机。3.需要自备乙醇，β-巯基乙醇，水浴锅。4.裂解液RLTplus2 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。5.RNA 纯度及浓度检测:完整性：RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳 (电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA，电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb，分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中较大rRNA 亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0 倍，否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。纯 度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9 之间，但这并不表示RNA 不纯。浓 度：取一定量的 RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×406.如果破壁效果不好导致RNA产量低，可以加大lyicase用量来提高酶工作浓度，还可以延长消化时间来提高*(&效&)果，不适合Lyticase消化的酵母可选用Zymolase或者其它方法如玻璃珠涡旋，反复冻融等。操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示：第*(&一&)次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指*(&定&)量无水乙醇!操作前在裂解液RLTplus2中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLTplus2 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液较好现用现配。配好的RLTplus2 4℃可放置一个月。吸取使用量的缓冲液SE加入0.1%β-巯基乙醇，回复到室温备用。1.小量酵母培养细胞a.收集1ml （约107细胞）处于对数生长期酵母培养物到1.5ml离心管， 9,000 rpm离心30秒，尽可能吸弃上清。b.加入100μl缓冲液SE（使用前先吸取使用量放入1.5ml离心管，回复到室温备用）中，轻柔吹打充分重悬细胞；根据酵母量加入约50U lyticase，充分颠倒混匀，37℃温育10－30分钟消化细胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。 c.加入350μl裂解液RLTplus2（确认已经加入β-巯基乙醇至终浓度1%），剧烈涡旋吹打，充分裂解混匀。（如果有明显不溶物，较高速离心2分钟，取全部上清）d.将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中），12,000rpm离心30~60秒，收集滤液。在滤液中加入250μl 96－100％乙醇，立即吹打混匀，不要离心。e.接操作步骤项下3。2.中量酵母培养细胞a.收集2－3ml （约3x107细胞）处于对数生长期酵母培养物到1.5ml离心管（超过1.5ml可分两次在同一个离心管内进行收集细胞），12,000rpm离心15秒，尽可能吸弃上清。b.加入600μl缓冲液SE（使用前先吸取使用量放入1.5ml离心管，回复到室温备用）中，轻柔吹打充分重悬细胞；根据酵母量加入约100-150U lyticase，充分颠倒混匀，37℃温育10－30分钟消化细胞壁，中间可颠倒数次帮助消化。c.12,000 rpm离心1分钟，尽可能吸弃上清。d.加入350μl裂解液RLTplus2（确认已经加入β-巯基乙醇至终浓度1%），剧烈涡旋吹打，充分裂解混匀。（如果有明显不溶解物，较高速离心2分钟，取上清）e.将所有裂解物上清转移至一个基因组DNA清除柱中（清除柱放入收集管中），12,000rpm离心30~60秒，收集滤液。在滤液中加入等体积70％乙醇（DEPC水配制，约350μl）立即吹打混匀，不要离心。f.接操作步骤项下3。3.将混合物加入一个吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000 rpm离心30-60秒，弃掉废液。4.加700μl 去蛋白液RW1，室温放置30秒，12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。如果DNA残留明显,可在加入RW1后室温放置5分钟再离心。5.加入700μl漂洗液RW（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μl漂洗液RW，重复一遍。6.将吸附柱RA放回空收集管中，12,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。7.取出吸附柱RA，放入一个RNase free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl RNase free water（事先在 70-80℃水浴中加热）， 室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。8.如果预期RNA产量&30μg,加30-50μl RNase free water重复步骤7, 合并两次洗脱液,或者使用第*(&一&)次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据需要选择。我公司生产供应销售的核酸电泳和回收产品正全系列现货促销，满分期待您的垂询选购。
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青年文明号如果跑出来的pcr结果出现拖尾，很多杂带是什么原因应该如何解决呢(杂带,拖尾,拖尾现象,跑电泳) - PCR实验 - 生物秀
标题: 如果跑出来的pcr结果出现拖尾，很多杂带是什么原因应该如何解决呢(杂带,拖尾,拖尾现象,跑电泳)
摘要: [如果跑出来的pcr结果出现拖尾，很多杂带是什么原因应该如何解决呢(杂带,拖尾,拖尾现象,跑电泳)] 各位老师兄台好，我最近一直忙着做RT-PCR，PCR产物跑电泳后的结果出现了杂带，拖尾现象，弄不明白是什么原因？应该如何去解决呢？还希望各位帮忙解答一下。谢谢！ 关键词:[杂带 拖尾 跑电泳 拖尾现象]……
各位老师兄台好，我最近一直忙着做RT-PCR，PCR产物跑电泳后的结果出现了杂带，拖尾现象，弄不明白是什么原因？应该如何去解决呢？还希望各位帮忙解答一下。谢谢！
回复拖尾的原因很多，在搜下，会有答案的。回复引物是不是降解了，退火温度是不是低了点，引物特异性是不是不咋地。回复上图看看。
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