蜂王浆主蛋白(MRJPs)作为灭活胎牛血清(FBS)替代品培养人体细胞的效果评价（英文）--《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》2016年06期
蜂王浆主蛋白(MRJPs)作为灭活胎牛血清(FBS)替代品培养人体细胞的效果评价（英文）
【摘要】：目的:为MRJPs应用于人体细胞培养提供科学依据,为发展蜂王浆在细胞工程的新用途提供技术支撑。创新点:首次验证MRJPs对多种人体细胞的促分裂效果,证实MRJPs可部分替代FBS培养人体细胞,并取得培养人体细胞的MRJPs与FBS和细胞因子的适合比例。方法:鲜蜂王浆中分离得到的MRJPs溶液与FBS按不同比例(0/10、3/7、6/4和9/1)复配成复合血清,分别添加于无血清培养基中用于培养293T、HFL-I、231、HCT116和Changliver等5种人体细胞。以添加体积分数为10%的FBS的无血清培养基为对照,根据MTT法测定的吸光度和细胞形态比较分析结果,得到促进细胞分裂的MRJPs溶液与FBS最佳配合比例。然后在筛选出的最佳复合血清中添加不同的细胞因子,再通过同样的比较分析,得到适合的细胞因子组合。结论:MRJPs对多种人体细胞具有促进分裂作用,可部分替代FBS培养人体细胞。MRJPs与FBS的最佳配比为:60%MRJPs溶液和40%FBS(复合血清);该复合血清与细胞因子的最佳组合为:复合血清+表皮生长因子+胰岛素-转铁蛋白-硒。
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【分类号】：Q813【正文快照】：
http://dx.doi.org/10.1631/jzus.B1500295 CLC number:Q253;S896.31 IntroductionRoyal jelly(RJ),a principal food of thehoneybee queen and larvae of worker bees,is secretedat the hypopharyngeal and mandibular glands bynurse honeybees.Due to its richness in bi
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医学训练治疗简介
&医学运动治疗（MTT）是利用系统的、有计划性的主动练习和训练，维持、改善和重建受损人体的功能和结构，帮助机体重新激活生理反应。它是多学科综合康复治疗理念的一部分，是对传统理疗（电疗，超声波，激光，按摩，中医）等被动治疗，作业治疗，认知治疗和言语治疗等的有效补充，在欧美国家广泛应用于各种肌肉骨骼疾患，和神经损伤病人，对老年病以及职业运动员也有着极好的效果。MTT包含有三种含义：◆医学（Medical）：利用医学对人体生理以及病理结构和功能的认识，准确判断发病原因，针对性治疗。◆训练（Training）：利用科学系统的主动训练方法，控制训练负荷达到机体功能改善。◆治疗（Therapy）：利用多种手段综合施治，达到标本兼治的目的。MTT的要求：●医生和治疗师具备有对相关医学知识的深度了解和训练科学的了解。●系统化的制定康复目标，在应用过程中遵循训练原则和长短期目标理念，MTT可取得满意效果和达到最佳治疗效果。●主动动作和练习由患者自主完成，可脱离治疗师辅助。●训练需要考虑患者的各种情况：◆个体化的医学诊断结果◆常规生理情况和状态◆个体化的能力和允许的生理负荷◆个体化的活动范围◆疼痛情况MTT的目的：MTT是一个客观的治疗理念。它是基于医学诊断学，治疗师功能检查和MTT技术和设备获得取得的客观的肌肉力量、耐力、协调性的评估结果，根据个人基础和前期情况来制定和实施MTT训练计划，缓解症状、提升机体功能状态。主要作用包括：◆镇痛◆牵伸短缩的肌肉、肌腱、关节囊及其他软组织、扩大关节活动度◆肌肉功能恢复（肌力、耐力、爆发力）◆针对患者功能障碍，抑制肌肉异常张力，实行运动功能的再学习，改善神经肌肉功能◆训练患者改善异常的生活模式◆日常生活能力：步态调整、降低跌倒风险、调整身体姿态（小儿驼背）◆提高运动功能：协调性、灵活性、耐力◆提高全身总体生理状态（心脏、肺等内脏功能）MTT的流程诊断、测试——、—评价、计划———、——干预、治疗———、——再测试、评估———（Assessment）&&& (Assignment)&&&&&&& (Inbeivention)&&&&&&&& (Evaluation)—诊断、测试&&&&MTT检查：◆神经肌肉测试&&&&&&&&&&&&&& ◆关节活动度◆肌力&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& ◆平衡◆本体感觉与协调性&&&&&&&&&& ◆心肺功能测试◆功能评估&&&&&&&&&&&&&&&&&& ◆步态◆日常生活能力&&&&&&&&&&&&&& ◆工作特殊能力&MTT适应症神经科◆中风患者◆脑外伤（视个体情况而定）◆脊髓损伤◆、◆多发性硬化◆帕金森◆等等骨科患者◆患者◆骨质酥松◆关节病◆意外上肢◆肩-肘-手部损伤和手术◆下肢◆髋-膝-踝◆髋/膝◆髋部损伤◆下肢损伤和手术◆膝关节韧带断裂（前交叉、后交叉）躯干和脊柱◆慢性腰背痛◆腰背痛术后患者（椎间盘，...）◆慢性颈部疼痛绝对和相对禁忌症◆总体身体状态虚弱不能进行训练◆一些心脏问题不能训练◆适应症相关的禁忌症◆一些疼痛—增加的疼痛◆进行炎症期◆认知、理解障碍◆增加的肌肉痉挛◆在MTT训练过程中眩晕或不适◆肿瘤MTT手段◆力量练习◆灵活性练习◆协调性、平衡和稳定性练习◆耐力训练
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采用刃天青法检测丝裂霉素（MMC）、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）三种抗肿瘤药物对人慢性髓系白血病细胞K562的敏感性,并与传统MrTT法的检测结果进行比较探索刃天青法用于检测抗肿瘤药物敏感性的可行性.结果表明：采用刃天青法测得丝裂霉素（MMC）、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用于K562细胞的最适浓度分别为100 μg/mL、30 μg/mL、100 μg/mL,最佳时间分别为6～16h、10 ～24h、6～16h,刃天青法和MTT法结果没有显著差异（P＞0.05）.结果提示：刃天青法和MTT法检测结果具有一致性,可用于抗肿瘤药物的敏感性检测.
目的验证补肾类中药有效成份是否具有促进体外培养成骨细胞增殖的作用。方法选用仙茅、菟丝子、沙苑子的黄酮和总多糖成份，用MTT比色法测定各药物组活细胞吸光度值（opticaldensity，OD），计算出不同浓度药物对细胞生长的抑制率，并对实验数据进行统计分析，比较细胞毒性大小。结果三种药物的黄酮提取成份均有较强的细胞毒作用；总多糖成份在合适的浓度下均能促进成骨细胞增殖一结论本实验从细胞水平证明了“肾主骨理论”的正确性，并推断补肾药促进成骨作用的主要成份是总多糖。
目的探讨乳癖合剂对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡的影响。方法采用MTT法观察乳癖合剂对MCF-7细胞生长抑制情况，双染色流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果高，中，低剂量组乳癖合剂对MCF-7肿瘤细胞的增殖抑制率（％）分别为48．31，36．56，23．79，乳癖合剂对MCF-7细胞的体外增殖存在抑制作用，与对照组比较，差异具有统计学意义（P〈0．01）。高，中，低剂量乳癖合剂组的细胞凋亡率为23．56％，19．87％，12．61％，乳癖合剂中高剂量组明显高于阴性对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论乳癖舍剂能诱导MCF-7细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖。
目的：设计合成一系列4-取代-7-氯喹啉衍生物并测定其抗肿瘤活性。方法：4，7-二氯喹啉通过烃化反应及缩合反应得到目标化合物，并采用MTT法，评价了其对4种体外培养肿瘤细胞的生长抑制作用。结果：大多数化合物具有一定的抑制肿瘤细胞增殖的活性，其中化合物3，5和10a抑制人非小细胞肺癌A549，NCI-H446，Hela细胞生长的作用强于阳性对照，化合物5和10a对于人非小细胞肺癌A549的抑制活性是阳性对照药的4～5倍，明显优于阳性对照。结论：本文合成的该系列部分化合物具有较好的抗肿瘤活性，是潜在的抗肿瘤候选药物。
分析丙烯酰胺（ACR）对人神经母细胞瘤NB-1细胞毒作用的剂量-效应和时间-效应关系,进一步探讨丙烯酰胺的神经毒性机制。将NB-1细胞诱导成熟后,设置正常对照及染毒浓度组、时间组,采用MTT法和LDH法检测各组细胞存活和生长情况,分析ACR对NB-1细胞的毒性作用。MTT结果表明,〉60μg/ml的ACR对NB-1细胞开始表现出明显的抑制作用,浓度越大,抑制作用越强。LDH结果表明,24 h、72 h时间点,ACR浓度〉60μg/ml,LDH释放率明显增高;而48 h则在ACR浓度〉40μg/ml,LDH释放率明显增高,且均随浓度的加大,LDH释放率逐渐升高。时间上,LDH结果与MTT一致,均以48 h表现最为显著。提示在一定浓度范围内,ACR显示出对NB-1细胞的毒性作用。
目的：探索研究不同剂量厚朴汁炙远志炮制品对胃间质细胞活力的影响。方法：将实验分成空白组、远志组、厚朴组、厚朴汁炙远志高、中、低剂量组、远志配厚朴1：2组七个不同剂量组对培养的胃间质细胞进行干预，24h后采用四唑盐比色实验（MTT法），考察厚朴炮制远志的水煎液及其含药血清对胃间质细胞活力的影响。结果：厚朴汁炙远志炮制品水煎液对胃间质细胞活力的影响结果显示，与单味生远志20g·kg^-1组比较，空白组、单味厚朴10g·kg^-1组、炮制高剂量30g·kg^-1组、远志配厚朴1：2（30g·kg^-1）组的胃间质细胞OD值均显著增高（F=2．750，P=0．024）；厚朴汁炙远志炮制品含药血清对胃间质细胞活力的影响结果显示，炮制高剂量30g·kg^-1组、远志配厚朴1：2（30g·kg^-1）组的含药血清的胃间质细胞OD值均显著高于空白组（F=10．22，P=0．000）；且单味厚朴10g·kg^-1。组、炮制高剂量30g·kg^-1。组、远志配厚朴1：2组（30g·kg^-1）的OD值均显著高于单味远志组（F=10．22，P〈0．05）。结论：远志有抑制胃动力起搏细胞活性趋势，单味厚朴组、厚朴汁炙远志炮制品组、远志配厚朴1：2组均能极显著促进胃间质细胞活力，从而促进胃动力，故推测厚朴能通过促进胃问质细胞的活力，在配伍和炮制过程中降低远志对胃间质细胞造成的伤害，而达到缓解胃肠动力障碍的目的。
[目的]观察国产多孔钽材料复合MG63细胞培养后细胞增殖粘附情况,并检测成骨相关因子Col-1、OC和OPN表达情况,研究国产多孔钽材料的生物相容性,为国产多孔钽的临床应用提供理论依据。[方法]将MG63细胞与国产多孔钽材料复合培养,通过倒置相差显微镜、扫描电镜观察检测细胞粘附情况,MTT法检测细胞增殖情况,免疫细胞化学和免疫蛋白印迹法,检测Ⅰ型胶原（collagen typeⅠ,Col-1）、骨钙素（osteocalcin,OC）和骨桥蛋白（osteopontin,OPN）表达变化情况。[结果]MG63细胞与多孔钽材料复合培养后,细胞增殖情况良好,与对照组比较无差异（P〉0.05）;细胞在材料表面及孔隙内生长粘附并长入孔隙中,并逐渐完全覆盖材料;免疫细胞化学与免疫蛋白印迹结果提示复合培养组出现Col-1、OC表达增强（P〈0.05）,OPN的表达无明显差异（P〉0.05）。[结论]国产多孔钽材料有利于MG63细胞的黏附、生长,具备良好的生物相容性,并可能影响Col-1、OC的表达。
目的研究多种注射用辅料刺激肥大细胞RBL-2H3脱颗粒的作用,建立和完善注射用辅料引发类过敏反应的筛选评价体系。方法以不同浓度的注射用辅料羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）、甲氧基聚乙二醇-聚乳酸共聚物40/60（mPEG-PDLLA40/60）、聚乙二醇400（PEG400）、聚乙二醇600（PEG600）、聚氧乙烯蓖麻油（CrEL）和吐温80处理RBL-2H3细胞,测定β-氨基己糖苷酶释放率,并通过MTT法进一步研究有脱颗粒作用的受试物对RBL-2H3细胞的毒性作用。结果 HP-β-CD、高浓度的mPEG-PDLLA40/60（40 mg/ml）和吐温80（3.0 mg/ml）均能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒,呈浓度依赖性;PEG400、PEG600和CrEL在本研究的浓度范围内均不能直接刺激RBL-2H3细胞脱颗粒。HP-β-CD有明显的细胞毒性,但不呈浓度依赖性;mPEG-PDLLA40/60无细胞毒性;吐温80没有明显的细胞毒性,但呈浓度依赖性。结论 RBL-2H3细胞的β-氨基己糖苷酶释放试验方法灵敏、重复性好,其结果与临床报道有一定的相关性,提示其有评价注射用辅料类过敏反应的潜在应用价值。高浓度的吐温80直接刺激肥大细胞脱颗粒的作用可能是由其细胞毒性引起的。
目的初步探讨硫酸镍（NiSO4）对小鼠精原细胞的毒作用。方法采用MTT、分光光度法和透射电子显微镜分别检测NiSO4，浓度为0、25、50、100、200、400和800μmol／L，染毒6、12、24和36h对体外培养小鼠精原细胞的增殖、乳酸脱氢酶（LDH）活力及其超微结构的影响。结果NiSO4显著抑制体外培养小鼠精原细胞的增殖，且存在剂量／时间依赖性（r=1，P〈0．01）。50μmol／LNiSO4染毒24和36h，100、200、400和800μmol／LNiSO4染毒6、12、24和36h时，精原细胞悬液LDH活力显著低于对照组（P〈0．05），并呈剂量／时间依赖性（r=-1，P〈0．01）。此外，NiSO4还可引起小鼠精原细胞超微结构改变，主要表现为细胞皱缩、胞内出现空泡，细胞膜和核膜破裂，细胞器模糊不清等现象，特别是NiSO。浓度在200μmol／L以上变化更明显。结论NiSO4对体外培养的小鼠精原细胞具有明显毒作用。
目的：本研究旨在观察丹酚酸B对体外培养新生大鼠海马神经元的影响,为丹酚酸B对中枢神经系统的作用提供实验依据。方法：体外培养新生大鼠海马神经元,神经元微管相关蛋白-2（MAP-2）免疫荧光染色对培养细胞进行鉴定,实验分为对照组和给药组（终浓度分别为5 mg/L和10 mg/L）,荧光显微镜下观察细胞形态,MTT比色法检测丹酚酸B对海马神经细胞的活性,细胞核染色（DAPI）观察丹酚酸B对海马神经细胞增殖的影响。结果：免疫荧光染色显示细胞呈MAP-2阳性,丹酚酸B作用7 d后,能明显促进海马神经细胞的存活与增殖,且10 mg/L的丹酚酸B作用更明显。结论：丹酚酸B能明显促进海马神经细胞的存活与增殖,提示其具有改善脑功能的重要作用。
金月芽期刊网 2017如何评价一个MTT的盲注结构？ - 知乎3被浏览248分享邀请回答0添加评论分享收藏感谢收起您所在位置： &
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FIAU用于心脏报告基因显像的实验研究.doc 78页
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华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
FIAU 用于心脏报告基因显像的实验研究
制备 125I- FIAU，培养原代心肌细胞，构建含 HSV1-tk 的腺病毒重组体，通过一
系列实验评价心肌细胞对该腺病毒重组体的易感性及感染后的活力，评估感染滴度及
感染时间对心肌细胞体外摄取
I-FIAU 的影响，为进一步探讨用腺病毒作为载体、
HSV1-tk 作为标志性基因、放射性核素标记的 FIAU 作为标志性底物进行心脏报告基
因显像的可行性打下基础。
1. FAU 的碘化标记及其在昆明小鼠体内的生物分布研究
利用 Iodogen 固相氧化
法碘化标记 FAU，标记反应产物用 Sep-Pak C18 反相色谱柱进行纯化，用硅胶板薄层
层析法测定
I-FIAU 的放射化学纯度和体外稳定性，并研究其在昆明小鼠体内的生
物分布情况，着重分析在心肌及血液中的分布特性。
2. 原代 SD 大鼠乳鼠心肌细胞的培养及鉴定 取 1～3 d 龄的 SD 大鼠乳鼠的心室
组织，切成 1mm3 的小块采用含牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）的型
胶原酶单次消化心肌，1 h 后用差速贴壁法纯化心肌细胞后培养，全过程在 25-37℃
条件下进行。在生物倒置显微镜下动态观察培养的心肌细胞的形态，用免疫组织化学
染色的方法进行纯度测定。
3. Ad-CMV-HSV1-tk 重组体的制备及鉴定
用 HSV1-tk 作为报告基因，用巨细胞
病毒作为启动子，腺病毒作为载体，构建腺病毒重组体，本部分与北京本元正阳公司
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
4. 感染 Ad5-tk 的心肌细胞活性及感染滴度和感染时间对其体外摄取 125I-FIAU 的
影响。 应用腺病毒重组体将 HSV1-tk 基因转染到心肌细胞中，用 MTT 的方法评价心
肌细胞感染病毒重组体后的活力，分析细胞活力与感染滴度的关系；用 RT-PCR 的方
法监测心肌细胞感染病毒重组体后有无 HSV1-tk mRNA 存在，并在更换含 125I-FIAU
的培养基后分别于 0.5h、1h、2h、3h、4h、5h 时测定不同感染滴度下的心肌细胞对
I-FIAU 的摄取率，分析摄取率与感染滴度和感染时间的相关性。
1. Iodogen 固相氧化法能有效碘化标记 FAU，标记反应产物经 Sep-Pak C-18 反相
色谱柱纯化后，125I-FIAU 的放射化学纯度为 98.60%±0.52%（n＝5）；125I-FIAU 在正
常人血清及 PBS 中 37条件下稳定，在 0.5h～24h 的时段内放射化学纯度&95％。生
物分布实验显示，125I-FIAU 从血液中清除迅速，肾脏是主要排泄器官，心肌 24h 后几
乎无滞留。
2. 用含牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）的型胶原酶单次消化心肌，
心肌组织在6 h时基本消化完全。5、10、15、20、25和30天时台盼兰染色法计算得到
心肌细胞存活率均大于95％，30 d时仍为95.2％；生物倒置显微镜下观察，24 h左右心
肌细胞之间形成交联，并有细胞搏动；培养48 h的细胞经免疫组织化学染色法测定心
肌细胞纯度为(97.1±1.9)％。
3. 与本元正阳公司协作构建腺病毒重组体，pDC316-tk质粒经PCR、酶切鉴定和
测序鉴定证明序列正确，得到Ad-CMV-HSV1-tk腺病毒重组体的物理滴度为1.1×1012，
感染滴度达到1.6×1010。
MTT 实验结果显示，心肌细胞感染腺病毒重组体后的活力与感染滴度存在负
相关的关系；RT-PCR 结果显示，心肌细胞感染腺病毒重组体后有 HSV1-tk mRNA 存
在。摄取率结果显示，腺病毒重组体感染后的心肌细胞体外对
感染滴度和感染时间呈明显正相关关系。
I-FIAU 的摄取率与
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
用 Iodogen 固相氧化法和 Sep-Pak C-
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