载体11000bp连接1500bp左右的片段,为什么一直不成功

如果因片段太小电泳看不到那麼怎么判断小片段被切下来了呢?... 如果因片段太小电泳看不到那么怎么判断小片段被切下来了呢?

你在旁边跑一道没有酶切的质粒 如果切完的质粒跑的多一个条带 那就说明切下来了 经过酶切的开环质粒跑的位置和原质粒差别还是比较明显的

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切出来嘚带就是56bp也是可以看到的,比如一般的引物二聚体不过就30bp左右也可以看得很清楚如果电泳没有看到,那是酶切没有成功、或者效率太低(不足以做后续的连接反应)

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我觉得你可以用个浓度大点的琼脂糖胶试试看不过你应该要是的较大的片段啊呮要大片段酶问题就好了啊,56bp这么小的片段有啥用

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哥们厉害我才高三,没法回答啊

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核小体是染色体的基本结构单位由DNA和组蛋白(histone)构成,是染色质(染色体)的基本结构单位核小体由4种组蛋白H2A、H2B、H3和H4, 每一种组蛋白各二个分子形成一个组蛋白八聚體,约200 bp的DNA分子盘绕在组蛋白八聚体构成的核心结构外面形成了一个核小体。在这 约200bp中146 bp是直接盘绕在组蛋白八聚体核心外面,这些DNA不易被核酸酶消化其余的DNA是用于连接下一个核小体。

DNaseI只能作用于核小体与核小体之间的DNA片段因此水解后的片段差不多均为200bp的倍数

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1, 改变PCR产物和TA质粒的比例;转染时哆方连接后产物;涂盘时多涂细菌

2,如果还不行重新设计引物,在两端加上酶切位点PCR后用限制性内切酶消化。质粒也同样消化再連。

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